膠孢炭疽菌ES026賴(lài)氨酸脫羧酶基因克隆及表達(dá)分析.pdf

1、石杉?jí)A甲（Huperzine A，Hup A）是一種用于治療阿爾茲海默癥重要神經(jīng)疾病的藥物，其主要來(lái)源于植物蛇足石杉。由于Hup A的化學(xué)合成尚未產(chǎn)業(yè)化，Hup A的生產(chǎn)嚴(yán)重依賴(lài)于蛇足石杉等植物，但極為有限的蛇足石杉資源、以及較低的提取產(chǎn)率限制了Hup A的生產(chǎn)?，F(xiàn)代生物技術(shù)手段是解決這一困境具有前景的方向，因此對(duì)Hup A合成代謝途徑的研究顯得尤為重要，尤其是對(duì)HupA代謝途徑中起關(guān)鍵作用基因的研究。
　　本研究以產(chǎn)Hup A內(nèi)

2、生真菌膠孢炭疽菌ES026為研究對(duì)象，以其轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果為基礎(chǔ)，挖掘并克隆出賴(lài)氨酸脫羧酶基因(CgLDC)相關(guān)序列，并就該基因的表達(dá)情況進(jìn)行了分析，主要研究結(jié)果如下：
　　1 CgLDC克隆及生物信息學(xué)分析獲得CgLDC的完整開(kāi)放閱讀框cDNA全長(zhǎng)885bp（GenBank號(hào)：KU554424）?；蚓幋a294個(gè)氨基酸蛋白，預(yù)測(cè)分子量約32.62kDa，等電點(diǎn)（pI）為8.51，為不穩(wěn)定性疏水蛋白，不具有信號(hào)識(shí)別功能；預(yù)測(cè)蛋白定位

3、于線粒體內(nèi)，無(wú)跨膜區(qū)?？寺〉腅S026的CgLDC序列與數(shù)據(jù)庫(kù)中被注釋為編碼LDC基因序列保持高度的相似性；蛋白質(zhì)同源性分析顯示，CgLDC與炭疽菌LDC具有較高的相似性，而與傘狀毛霉菌LDC相似性較低。
　　2原核表達(dá)構(gòu)建重組質(zhì)粒，選用大腸桿菌BL21(DE3)作為表達(dá)宿主，對(duì)CgLDC進(jìn)行外源重組表達(dá)，采用SDS-PAGE檢測(cè)目標(biāo)蛋白。成功構(gòu)建了表達(dá)重組菌株，獲得pcoldI/LDC重組蛋白。結(jié)果顯示，目標(biāo)蛋白成功表達(dá)，與預(yù)測(cè)