間隙連接半通道的開放加劇鎘誘導的氧化應激和細胞損傷.pdf

1、目的：間隙連接(Gap Junction,GJ)是細胞間通道,在細胞的增殖、遷移、分化和生存等生理活動中起重要作用,同時還參與許多病理過程。鎘是重金屬環(huán)境污染物,可導致多種細胞損傷。本次實驗目的是探討GJ在鎘誘導的細胞損傷中的作用及作用機理。
　　 方法:1.用豬腎小管上皮細胞和小鼠成纖維細胞模型做體外試驗。2.用Formazan方法分析細胞生存能力。3.蛋白免疫印跡法測定JNK蛋白的表達水平。4.用LY攝人和ATP釋放實驗觀察

2、間隙連接半通道的開放。
　　 結(jié)果:1.腎小管上皮細胞系(ILC-PK1)表達野生型即功能性Cx43蛋白的細胞對鎘的敏感性明顯高于表達變異型即非功能性Cx43蛋白的細胞。主要表現(xiàn)是細胞形態(tài)的變化；細胞活性的降低；c-jun氨基末端激酶(c-JunN-terminal kinase,JNK)活性的增強。2.鎘誘導的細胞損傷與細胞的氧化還原水平密切相關。3.表達不同水平Cx43蛋白的小鼠胚胎成纖維細胞對鎘誘導的損傷與細胞內(nèi)的GSH水

3、平相關。鎘刺激成纖維細胞發(fā)現(xiàn),隨著鎘作用時間的延長,細胞內(nèi)的GSH水平梯度降低而細胞外的GSH水平增加,而且這種變化在Cx43+/+細胞比Cx43-/-細胞更明顯。4.在Cx43+/+細胞鎘誘導GJ的半通道(GJ Hemichannel)開放,其表現(xiàn)是鎘促進細胞內(nèi)熒光黃(Lucifer Yellow,LY)的攝入和增強細胞外ATP漏出。
　　 結(jié)論:我們的實驗結(jié)果首次表明在鎘誘導的細胞損傷中GJ是一個重要因素。鎘誘導GJ半通道的