Na-PCP誘導(dǎo)L-02肝細(xì)胞氧化應(yīng)激和線粒體損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 在體外試驗(yàn)系統(tǒng)(in vitro test)，研究有機(jī)氯農(nóng)藥-五氯酚鈉(Pentachlorophenol Sodium，Na-PCP)對(duì)L-02肝細(xì)胞氧化應(yīng)激和線粒體損傷，為進(jìn)一步了解五氯酚鈉的毒作用機(jī)制奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法： 以L-02肝細(xì)胞為受試細(xì)胞，通姍T試驗(yàn)檢測(cè)不同濃度Na-PCP對(duì)L-02肝細(xì)胞存活率的影響，選擇細(xì)胞存活率為20％～90％的濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。設(shè)置1個(gè)對(duì)照組和5個(gè)Na-PCP處理

2、組，即12.812mg/L、19.218mg/L、25.624mg/L、32.030mg/L和38.436mg/L，處理時(shí)間為24h，采用化學(xué)比色法檢測(cè)Na-PCP對(duì)L-02肝細(xì)胞超氧化物岐化酶(superoxide dismutase，SOD)活力、谷胱甘肽(reduced glutathione，GSH)和丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量的影響：采用熒光分光光度法檢測(cè)Na-PCP對(duì)L-02肝細(xì)胞線粒體膜電位(AΨ

3、m)和線粒體通透性轉(zhuǎn)運(yùn)孔(permeability transition pore，PTP)的影響。設(shè)置1個(gè)對(duì)照組和9.609mg/L、12.812mg/L、19.218mg/L三個(gè)處理組，處理時(shí)間為24h，采用Westem Blotting法檢測(cè)Na-PCP對(duì)肝細(xì)胞p53、細(xì)胞色素C和凋亡誘導(dǎo)因子(apoptosis-inducing factor，AIF)的蛋白水平的影響。 結(jié)果: 1.在9.609mg/L～38.4

4、36mg/L濃度范圍內(nèi)，Na-PCP能明顯引起L-02肝細(xì)胞存活率的降低，且存在著濃度-反應(yīng)關(guān)系(r=0.978，P<0.01)。 2.與對(duì)照組相比，12.812mg/L～38.436mg/L Na-PCP均可導(dǎo)致L-02肝細(xì)胞內(nèi)MDA含量增加(r=0.956，P<0.01)。SOD活性下降(r=0.900，P<0.01)，GSH含量減少(r=0.975，P<0.01)。 3.與對(duì)照組比較，在12.812mg/L～38.

5、436mg/L濃度范圍內(nèi)，隨著Na-PCP染毒濃度的增加，線粒體PTP開放度明顯增大(P<0.01)，且PTP開放度與濃度之間呈現(xiàn)明顯的濃度-反應(yīng)關(guān)系(r=0.997，P<0.01)。 4.與對(duì)照組比較，在12.812mg/L～38.436mg/L濃度范圍內(nèi)，Na-PCP導(dǎo)致熒光吸光度值升高，線粒體膜電位明顯降低(P<0.01)，且膜電位的下降呈濃度依賴性(r=0.795，P<0.01)。 5.經(jīng)9.609mg/L、12

6、.812mg/L和19.218mg/L Na-PCP處理L-02肝細(xì)胞，各組細(xì)胞p53、細(xì)胞色素C和AIF的蛋白水平明顯高于對(duì)照組細(xì)胞(P<0.05)。 結(jié)論： Na-PCP在9.609mg/L～38.436mg/L的濃度范圍內(nèi)，能引起L-02肝細(xì)胞存活率下降，誘發(fā)氧化損傷，表現(xiàn)為SOD酶活力和GSH含量下降，MDA含量上升。Na-PCP導(dǎo)致肝細(xì)胞線粒體膜電位崩潰和通透性轉(zhuǎn)運(yùn)孔開放度增大，并使得細(xì)胞色素C和AIF從線粒體