氟致L-02細(xì)胞氧化應(yīng)激、DNA損傷與細(xì)胞凋亡的關(guān)系及其對p53表達的影響.pdf

1、該研究擬用人類來源的人胚肝細(xì)胞(L-02)為靶細(xì)胞,進行體外實驗,從氧化應(yīng)激、DNA損傷和p53的表達水平三個方面來闡明氟致細(xì)胞凋亡的作用機制,為深入研究氟毒作用機制提供理論依據(jù).體外培養(yǎng)的人胚肝細(xì)胞接觸40、80、160 μg/ml氟化鈉24h后,分別采用MTT試驗和流式細(xì)胞術(shù)檢測L-02細(xì)胞存活率、細(xì)胞凋亡百分率和細(xì)胞周期構(gòu)成比;用全自動生化分析儀檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)

2、的活性;用TBA法測細(xì)胞培養(yǎng)液和細(xì)胞裂解液中LPO水平;用Beutler改良法測細(xì)胞裂解液中GSH含量;用單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)(SCGE)檢測DNA損傷;運用western blot和RT-PCR技術(shù)分別檢測p53蛋白水平和p53轉(zhuǎn)錄水平.該實驗結(jié)果表明:氟可抑制L-02細(xì)胞增殖,導(dǎo)致細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的損傷;氟可致L-02細(xì)胞出現(xiàn)氧化應(yīng)激和DNA損傷,增加p53轉(zhuǎn)錄活性和誘導(dǎo)p53基因表達,并且氟濃度與氧化應(yīng)激、DNA損傷和p53蛋白水平之間均