獼猴桃AcGLK2基因過表達載體的構(gòu)建及在番茄中的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、番茄紅素和β-胡蘿卜素是人體必需的營養(yǎng)元素,但是人類無法通過自身代謝合成,主要從食物中攝取。成熟的番茄中含有的主要色素是番茄紅素和β-胡蘿卜素。因此,人體攝取番茄紅素和β-胡蘿卜素的主要來源之一就是番茄。番茄紅素和β-胡蘿卜素都是具有很強活性的氧化劑,可以幫助人體清除體內(nèi)的自由基,從而延緩人體衰老,也可以提高人體免疫力。有研究表明,SlGLK2(Solanum Lycopersicum GOLDEN2- LIKE)基因可以提高番茄果實中

2、的番茄紅素和β-胡蘿卜素含量,同時可以增加果實中碳水化合物的含量。
　　本實驗獲得了獼猴桃基因 AcGLK2的兩個可變剪接轉(zhuǎn)錄本,分別命名為AcGLK2a和AcGLK2b。構(gòu)建了pBTEX-AcGLK2a-Flag(Actinidia Lindl GOLDEN2-LIKE), pBTEX-AcGLK2a-Flag(Actinidia Lindl GOLDEN2-LIKE)兩個煙草瞬時表達載體,將帶有載體的農(nóng)桿菌注射煙草葉片,使用W

3、estern-Blot檢測AcGLK2a、AcGLK2b蛋白在煙草中表達的情況,實驗結(jié)果表明,AcGLK2a、AcGLK2b基因均能表達40KD左右大小的蛋白。
　　構(gòu)建獼猴桃 AcGLK2a基因過表達載體,轉(zhuǎn)入番茄植株中,對轉(zhuǎn)基因番茄果實進行初步分析,可為采用基因工程方法轉(zhuǎn)入外源基因?qū)Ω牧挤压麑嵠焚|(zhì)做新的嘗試。提取獼猴桃 RNA基因,進行反轉(zhuǎn)錄得到獼猴桃 cDNA, PCR獲得獼猴桃AcGLK2a、AcGLK2b基因。將獼猴桃

4、AcGLK2a、AcGLK2b基因序列分別導(dǎo)入帶有35S啟動子的植物表達載體 pBI121上。將所構(gòu)建的的pBTEX-AcGLK2a-Flag和pBTEX-AcGLK2a-Flag表達載體,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方式轉(zhuǎn)入番茄植株中,得到AcGLK2a轉(zhuǎn)基因番茄苗并做陽性鑒定,沒有得到AcGLK2b轉(zhuǎn)基因番茄苗。半定量分析轉(zhuǎn)基因番茄和野生番茄的AcGLK2a的表達量,并測量轉(zhuǎn)基因番茄和野生番茄的果實中的葉綠素和番茄紅素的含量,同時測定轉(zhuǎn)基因番茄