重組類人膠原蛋白（Ⅱ）分離純化的工藝研究.pdf

1、蛋白質的分離純化是生化分離工程的一個重要組成部分，本文主要研究重組類人膠原蛋白Ⅱ的分離純化工藝?；蚬こ叹鶨·coliBL21經(jīng)細胞破碎、沉淀、超濾分離后，再通過離子交換層析純化，得到較高純度類人膠原蛋白Ⅱ。 在細胞破碎階段，通過對細胞破碎方法的選擇，系統(tǒng)研究了高壓勻漿過程物理和化學因素的影響。包括操作方式、勻漿次數(shù)、操作壓力、料液懸浮濃度的影響。從而選擇采用高壓勻漿法批式循環(huán)，經(jīng)2次破碎，操作壓力為70MPa、菌體懸浮液濃度為

2、：菌體質量：水體積=1∶10。建立破碎率隨操作壓力變化的方程S=1-(e0.058*2-0005p0.906)-1。在沉淀階段，通過單因素實驗逐個確定沉淀各條件的范圍，采用L16(45)正交表，經(jīng)方差分析確定沉淀條件為pH2.8，NaCl濃度5％、溫度18℃，蛋白濃度5g/L。沉淀后，重組類人膠原蛋白Ⅱ的純度達到37.68％，回收率達到88.73％。 在超濾階段，采用截留分子量為30kD的膜包對沉淀后的上清液進行超濾，選擇的超濾

3、條件為：壓力：0.2MPa、pH=7，料液濃度：0.3％、料液溫度：25℃、料液的體積流量：2L/min。并建立了超濾模型： J=△P/0.006871+2.411*v-4.15*w0.78*△P3.848+1.424*v-1.601*w0.928*△P3.849。原蛋白Ⅱ的純度達到47.62％，回收率達到91.04％。 在層析階段，對陰離子(DE52)、陽離子(CM52)交換樹脂的分離效果進行比較，采用陽離子(CM52