人FL重組蛋白分離純化工藝的建立及其在急性輻射損傷小鼠救治中的運用.pdf

1、 本研究在已成功地克隆和高效表達人FL重組蛋白的工作基礎(chǔ)上，展開了以下幾方面的實驗研究：建立rhFL的分離純化工藝，獲得足夠量的、高純度且具有生物學(xué)活性的重組FL蛋白；采用亞致死劑量6.0Gy60Coγ照射BALB/C小鼠造成急性輻射損傷，在輻射前、后用FL、G-CSF、EPO、IL-11等單獨或聯(lián)合進行救治，觀察外周血細胞、骨髓細胞集落培養(yǎng)CFU-MIX計數(shù)及生存期的改變；同時做光鏡切片，觀察小鼠各臟器的形態(tài)學(xué)改變，從而分析這些

2、細胞因子對急性輻射損傷小鼠骨髓造血功能的恢復(fù)，各臟器的輻射防護效應(yīng)及生存期的改變，為臨床放、化療病人的治療提供理論依據(jù)和實驗參數(shù)；rhFL對造血系統(tǒng)惡性腫瘤細胞株細胞(Raji)的體外作用研究，為FL在臨床中的應(yīng)用提供有價值的資料?！　⊙芯拷Y(jié)果表明：采用全自動發(fā)酵裝置，獲得畢氏酵母高效表達rhFL，再經(jīng)DEAE離子柱、凝膠過濾柱SUPERDEXtm-200prepgrade和FPLC分離系統(tǒng)進行分離純化，最終獲得較高純度的重組蛋白，經(jīng)

3、Raji細胞對FL的增殖實驗和造血細胞體外集落形成實驗分析，證明所得的重組蛋白有良好的生物學(xué)活性；FL、G-CSF、EPO、IL-11單獨或聯(lián)合處理可明顯增加受輻照小鼠的骨髓細胞、外周血WBC、PLT、RBC和CFU-MIX的數(shù)量，與對照組相比均有顯著性差異。切片觀察，重組FL對小鼠的肝、心、肺、腎有明顯治療作用，與對照組相比，能明顯提高實驗組小鼠的生存率，提示FL等細胞因子對受輻照小鼠的骨髓造血功能具有明顯生物學(xué)效應(yīng)，動物模型中獲得的