替米沙坦對野百合堿誘導(dǎo)大鼠肺動脈高壓的保護作用及機制初探.pdf

1、背景和目的
　　 肺動脈高壓（PH）是一組異源性疾病和不同發(fā)病機制引起的以肺血管阻力持續(xù)增加為特征的臨床-病理生理綜合征。動脈型肺動脈高壓（PAH）是PH的常見的類型之一，以肺小動脈的增生、重構(gòu)為特點。野百合堿（MCT）誘導(dǎo)PAH（MCT-PAH）大鼠是研究最常用模型之一。已證實腎素血管緊張素系統(tǒng)（RAS）在PAH發(fā)病中發(fā)揮一定作用。替米沙坦是新一代長效血管緊張素Ⅱ的1型受體（AT1R）拮抗劑，已經(jīng)證實它有抗炎、抑制心臟和血管肥

2、大、重構(gòu)和細(xì)胞增殖等作用。本研究通過建立MCT-PAH大鼠模型，觀察替米沙坦預(yù)防干預(yù)對PAH肺血管重構(gòu)的保護效應(yīng)，并進一步探討可能的作用機制。
　　 方法：
　　 1.實驗動物分組：Sprague-Dawley大鼠32只，每組8只，隨機分為：對照組（C組），皮下注射NS1次。PAH模型組（P組），皮下注射。MCT（60㎎/㎏體重）1次，NS灌胃3周。PAH+Tel高劑量組（PTh組），皮下注射MCT（60㎎/㎏體重）1次

3、，當(dāng)日即開始Tel（10㎎/㎏/day）灌胃3周。PAH+Tel低劑量組（PT1組），皮下注射MCT（60㎎/㎏體重）1次，當(dāng)日同時開始Tel（5㎎/㎏/day）灌胃3周。
　　 2.干預(yù)3周后大鼠行右心導(dǎo)管檢查測定右心室收縮壓（RVSP）和肺動脈平均壓（mPAP）；分離心臟測定右心室肥大指數(shù)（RVHI）、肺小動脈中膜厚度百分比（WT％）、腺泡內(nèi)肺小動脈肌化程度以及對肺小動脈周圍炎性程度進行評分。
　　 3.應(yīng)用ELIS

4、A試劑盒測定肺組織中IL-6、MCP-1和TNF-α蛋白水平的表達(dá)。
　　 4.應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測MMP-2和MMP-9在肺血管的表達(dá)；應(yīng)用實時熒光定量PCR（RT-PCR）技術(shù)檢測肺組織中MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表達(dá)；明膠酶譜法檢測肺組織MMP-2和MMP-9的活性。
　　 5.應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測ACE2蛋白在肺血管的表達(dá)情況；應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測肺組織中ACE2 mRNA的表達(dá)。

5、>　　 結(jié)果：
　　 1.替米沙坦對MCT-PAH大鼠mPAP、RVSP、RVHI、肺小動脈重構(gòu)和肺小動脈周圍炎癥評分的影響：C組mPAP、RVSP和RVHI分別為17.13±3.30㎜Hg，40.33±5.77㎜Hg和0.25±0.02；P組此三項指標(biāo)（37.00±4.98㎜Hg，67.04±4.87㎜Hg，0.40±0.02）均較C組明顯增高，存在顯著性差異（P<0.01）；替米沙坦可抑制MCT誘導(dǎo)mPAP、RVSP、RV

6、H1的升高，PTh和PT1組此三項指標(biāo)分別為24.75±4.69㎜Hg，52.30±8.37㎜Hg，0.2±0.01和26.27±5.46mmHg，53.25±8.65mmHg，0.34±0.02，兩組與P組比較均存在顯著性差異（P<0.01），兩組與C組比較仍存在顯著性差異（P<0.01）；PTh與PT1組間mPAP、RVSP無顯著性差異（P>0.05），RVHI在PTh組較PT1組更低，存在顯著性差異（0.29±0.01 vs0.3

7、4±0.02，P<0.01）。
　　 P組肺病理HE染色顯示肌型肺動脈管壁明顯增厚，平滑肌層增生肥厚明顯，管腔狹窄，腺泡內(nèi)肺微小動脈肌型化。P組肺小動脈中膜厚度百分比（WT％）較C組明顯增加，存在顯著性差異（45.52±5.48％vs8.91±2.30％，P<0.01）；PTh和PT1組的WT％分別為13.83±1.83％和20.84±15.21％，均較P組明顯降低，存在顯著性差異（P<0.01）；兩組均較C組仍增厚，存在顯著性

8、差異（P<0.01）；PTh和PT1組間比較，WT％無顯著性差異（P>0.05）。P組腺泡內(nèi)肺小動脈肌化程度較C組明顯增加，存在顯著性差異（67.55±2.95％vs19.92±2.27％，P<0.01）；PTh和PT1組此指標(biāo)分別為50.83±3.12％和53.22±1.97％，均較P組明顯降低，存在顯著性差異（P<0.01）；兩組與C組相比較，此項指標(biāo)仍增加，存在顯著性差異（P<0.01）；PTh和PT1組間相比較，此項指標(biāo)無顯著性

9、差異（P>0.05）。P組肺小動脈α-SMA免疫組化染色平均光密度（IOD/Area）值較C組有明顯增加，存在顯著性差異（0.49±0.03vs0.22±0.04，P<0.01）；PTh和PT1組IOD/Area值分別為0.34±0.02和0.36±0.02，均較P組有明顯降低，存在顯著性差異（P<0.01）；兩組與C組相比較，IOD/Area值仍增加，存在顯著性差異（P<0.01）；PTh組IOD/Area值和PT1組低，存在顯著性差

10、異（P<0.05）。
　　 P組肺小動脈周圍有明顯的單核細(xì)胞浸潤，血管周圍炎癥評分較C組明顯增加，存在顯著性差異（3.2±0.41 vs0.4±0.16，P<0.01）；PTh和PT1組評分分別為
　　 1.00±0.19和1.46±0.31，均較P組明顯降低，存在顯著性差異（P<0.01）；兩組的炎癥評分仍高于C組，存在顯著性差異（P<0.01）。兩組間相比較，PTh低于PT1組炎癥評分，存在顯著性差異（1.00±0.

11、19 vs1.46±0.31，P<0.05）。
　　 2.替米沙坦對MCT-PAH大鼠肺組織IL-6、TNF-α和MCP-1表達(dá)的影響：P組IL-6、TNF-α和MCP-1與C組比較明顯增高，存在顯著性差異（459.40±94.77pg/ml vs64.97±17.65pg/ml，436.46±62.20pg/ml vs56.51±14.92pg/ml，6265.53±2014.83pg/ml vs65.18±23.37pg/m

12、l，P<0.01）；替米沙坦干預(yù)可抑制MCT大鼠肺組織IL-6、TNF-α和MCP-1的升高，PTh和PT1組分別為118.87±25.80pg/ml，242.61±37.52pg/ml，1094.39±577.75pg/ml和155.87±50.64pg/ml，278.69±42.35pg/ml，1288.5±593.14pg/ml，與P組比較均明顯降低，存在顯著性差異（P<0.01），但三項均仍較C組增高，存在顯著性差異（P<0.0

13、1）；PTh和PT1組問比較IL-6、TNF-α和MCP-1均無顯著性差異（P>0.05）。
　　 3.替米沙坦對肺組織MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表達(dá)及MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)和活性的影響：
　　 P組MMP-2和MMP-9主要在肺血管內(nèi)膜和外膜及周圍的結(jié)締組織表達(dá)，明顯強于C組，PTh和PT1組均比P組明顯降低但仍高于C組。P組肺組織MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA表達(dá)明顯高于

14、C組，均存在顯著性差異（3.30±0.39 vs0.96±0.08，7.07±0.54 vs0.96±0.06，3.52±0.44 vs1.02±0.14，P<0.01）；PTh和PT1組這三項分別為1.97±0.24，3.65±0.70，2.22±0.35和2.43±0.21，4.91±0.68，2.54±0.43，與P組比較均明顯降低，存在顯著性差異（P<0.01），但仍均較C組增高，存在顯著性差異（P<0.01）；MMP-2和MM

15、P-9 mRNA在PTh組均較PT1組低，存在顯著性差異（P<0.05）；TIMP-1 mRNA在這兩組間無顯著性差異（P>0.05）。
　　 P組肺組織MMP-2、MMP-9的活性明顯高于C組，存在顯著性差異（54893.89±8480.12 vs40669.68±4978.39，P<0.05；23）。PTh和PT1組MMP-2活性分別為52401.41±6234.28和51651.18±5289.70，均較P組降低不明顯，無

16、顯著性差異（P>0.05），均較C組升高，存在顯著性差異（P<0.05）。PTh和PT1組MMP-9活性分別為14244.99±2601.82和14896.96±3625.29，仍均高于C組，存在顯著性差異（P<0.05）；PTh和PT1組MMP-9活性較P組降低，存在顯著性差異（分別P<0.01和P<0.05）；PTh和PT1組間MMP-2和MMP-9活性均無顯著性差異。
　　 4.替米沙坦對肺組織ACE2 mRNA和蛋白表達(dá)

17、的影響：
　　 ACE2主要在肺小動脈內(nèi)膜陽性表達(dá)，P組表達(dá)量較C組明顯下降，PTh和PT1組表達(dá)量較P組明顯升高，甚至還高于C組。P組肺組織ACE2 mRNA表達(dá)明顯低于C組，存在顯著性差異（0.56±0.09 vs1.04±0.14，P<0.01）；ACE2 mRNA在PTh和PT1組分別為2.08±0.40和1.65±0.44，與P組比較均明顯增高，存在顯著性差異（P<0.01），較C組亦均增高，存在顯著性差異（P<0.0

18、1）。PTh組mRNA表達(dá)較PT1組高，存在顯著性差異（P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.替米沙坦預(yù)防干預(yù)可延緩MCT-PAH大鼠mPAP和RVSP的升高，減輕右心室肥厚和肺血管重構(gòu)。
　　 2.替米沙坦可抑制MCT-PAH大鼠肺組織IL-6、TNF-α和MCP-1升高及肺小動脈周圍炎癥，可能與其對肺血管的保護作用有關(guān)。
　　 3.替米沙坦可通過降低MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表達(dá)和MM