基于疏水化修飾羧甲基殼聚糖自組裝納米粒的制備及應(yīng)用.pdf

1、本論文利用1-乙基-3-(3-二甲基丙基)·碳二亞胺(1-ethy1-3-(3-dimethylaminopropyyl)-carbodiimide，EDC)介導(dǎo)反應(yīng)合成了亞油酸修飾羧甲基殼聚糖(1inoleic-acid modified carboxymethyl-chitosan，LCC)、葉酸修飾羧甲基殼聚糖(folate modified carboxymethyl-chitosan，F(xiàn)CC)兩種兩親性殼聚糖復(fù)合物，核磁共振圖

2、譜檢測(cè)并證明了產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)。 通過(guò)超聲乳化的方法制備出納米微粒并檢測(cè)了納米微粒的性質(zhì)。利用芘作為熒光探針來(lái)研究水溶液中疏水微區(qū)的形成，測(cè)定了臨界聚集濃度，結(jié)果表明三種不同亞油酸取代度的LCC的臨界聚集濃度分別為0.061，0.072與0.081 mg/ml。激光粒度散射儀檢測(cè)結(jié)果顯示，LCC納米粒的平均粒徑為412nm，F(xiàn)CC納米粒的平均粒徑為268nm。通過(guò)透射電鏡觀察，納米粒呈球形，結(jié)構(gòu)完整。 納米?？梢宰鳛椴ぬ}蛋白酶

3、的載體。通過(guò)物理結(jié)合和化學(xué)結(jié)合兩種方法使酶負(fù)載于納米粒上。結(jié)果表明，菠蘿蛋白酶被固定化后，熱穩(wěn)定性及儲(chǔ)存穩(wěn)定性均有提高。這是因?yàn)槊负图{米粒之間的多種作用(比如離子相互作用、氫鍵結(jié)合以及疏水作用力等)。固定化酶的Km值小于自由酶，表明固定化可以提高酶的穩(wěn)定性并加強(qiáng)酶與底物的親和力。原因可能是固定化過(guò)程對(duì)酶的構(gòu)象有影響；另外，納米粒與酪蛋白之間的電荷作用或疏水作用也加強(qiáng)了酶對(duì)底物的親和力。 作為抗腫瘤藥物阿霉素的藥物載體，檢測(cè)了不同

4、亞油酸取代度，不同初始藥物濃度對(duì)載藥量、包封率及體外釋藥特性的影響。結(jié)果表明，提高藥物初始濃度，納米粒的包封率降低，載藥量升高，藥物釋放速度加快；隨著亞油酸取代度增加，載藥量與包封率提高，藥物釋放速度減慢。主要因?yàn)榧{米粒中疏水結(jié)構(gòu)域與疏水藥物之間的強(qiáng)疏水作用，而且殼聚糖納米粒有剛性結(jié)構(gòu)和疏水的內(nèi)核，這一結(jié)構(gòu)將限制藥物的釋放。 進(jìn)一步比較了兩種載阿霉素(DOX)納米粒LCC、FCC對(duì)腫瘤細(xì)胞(Hela)生長(zhǎng)的抑制作用。3-(4，5

5、-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽(3-(4，5-dimehyl-2-thiazolyl)-2，5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide，MTT)比色法表明，二者均表現(xiàn)出濃度、時(shí)間依賴性的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。FCC-DOX比LCC-DOX具有更高的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制活性；在細(xì)胞對(duì)納米粒攝取的定性測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞對(duì)FCC納米粒表現(xiàn)出更好的吞噬效果。通過(guò)熒光顯微鏡也觀察到納米粒通過(guò)細(xì)胞吞噬作用進(jìn)入了細(xì)胞。這