高氨基酸環(huán)境下大鼠腎系膜細(xì)胞結(jié)締組織生長因子的表達(dá)及氨基胍與維生素E的抑制效應(yīng).pdf

1、目的：研究高氨基酸環(huán)境下大鼠腎小球系膜細(xì)胞（mesangial cells，MCs）結(jié)締組織生長因子（connective tissue growth factor，CTGF）的表達(dá)情況，探討高氨基酸環(huán)境是否會(huì)造成對(duì)系膜細(xì)胞的直接損傷，其可能的損傷機(jī)制是否與高糖所致的系膜細(xì)胞損傷存在共同之處。
　　 方法：大鼠腎系膜細(xì)胞分為不同培養(yǎng)條件下的8組：(1)對(duì)照組（C組）：加入含有5％胎牛血清的普通低糖DMEM培養(yǎng)基（糖濃度為5.5m

2、mol/L）；(2)高糖組（HG組）：加入含5％胎牛血清的高糖DMEM（糖濃度為30.5mmol/L）培養(yǎng)基；(3)高氨基酸組（HA組）：加入含5％胎牛血清，8.5％樂凡命?及L-精氨酸的普通低糖DMEM培養(yǎng)基（糖濃度為5.5mmol/L）；(4)高氨基酸高糖組（HA/HG組）加入含5％胎牛血清，8.5％樂凡命?及L-精氨酸的高糖DMEM培養(yǎng)基（糖濃度為30.5mmol/L）。分別與上述4組培養(yǎng)條件相同的另4組細(xì)胞加入糖基化終末產(chǎn)物（a

3、dvanced glycation end products，AGEs）抑制劑氨基胍（Aminoguanidine，AG）（0.5mmol/L）成為AG干預(yù)組；或者加入抗氧化劑維生素E（Vit E）（25μmol/L）成為Vit E干預(yù)組（干預(yù)組均用C’組,HG’組,HA’組,HA/HG’組表示）。各組細(xì)胞分別經(jīng)不同培養(yǎng)基處理24h后，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription-polymerase chain re

4、action，RT-PCR)檢測CTGFmRNA表達(dá)；處理48h后Western blot檢測CTGF蛋白表達(dá)。同時(shí)細(xì)胞經(jīng)4種環(huán)境培養(yǎng)24h后檢測細(xì)胞的氧化應(yīng)激狀態(tài)，即通過觀察各組加入的熒光染料（2’,7'-Dichloroluorescin diacetate）與細(xì)胞內(nèi)活性氧產(chǎn)物（Reactive Oxygen Species，ROS）結(jié)合后熒光強(qiáng)弱，并將熒光強(qiáng)弱轉(zhuǎn)換成灰度值，灰度值越小表示熒光越強(qiáng)，從而檢測氧化應(yīng)激狀態(tài)；加入VitE

5、干預(yù)后各組氧化應(yīng)激水平的變化也用此方法檢測。
　　 結(jié)果：①各組細(xì)胞經(jīng)不同培養(yǎng)液處理24h及48h后CTGFmRNA及蛋白的表達(dá)：HG組、HA組、HA/HG組CTGFmRNA和蛋白的表達(dá)明顯高于C組（P<0.05）；加入AG或VitE干預(yù)后的HG’組、HA’組、HA/HG’組CTGFmRNA和蛋白的表達(dá)較相同環(huán)境組AG或VitE干預(yù)前明顯下降（P<0.05），且與C’組之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；②各組細(xì)胞經(jīng)不同培養(yǎng)

6、液處理24h后氧化應(yīng)激水平的變化：HG組、HA組、HA/HG組氧化應(yīng)激水平較C組顯著增高（灰度值比較P<0.05）,且HA/HG組氧化應(yīng)激水平高于HG組、HA組（灰度值比較P<0.05），而各組中加入Vit E后，HG’組、HA’組、HA/HG’組氧化應(yīng)激水平較相同環(huán)境組VitE干預(yù)前明顯下降（灰度值比較P<0.05），且其灰度值與C’組之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論：高氨基酸或高糖環(huán)境下大鼠腎系膜細(xì)胞CT