腹膜透析大鼠腹膜結(jié)締組織生長(zhǎng)因子的表達(dá)及意義.pdf

1、腹膜透析(PD)是治療終末期腎臟疾病(ESRD)的有效方法之一，國(guó)內(nèi)外大量數(shù)據(jù)表明持續(xù)性非臥床腹膜透析(CAPD)與血液透析(HD)一樣有效，甚至有一些獨(dú)特的優(yōu)越性，因此現(xiàn)在有許多學(xué)者提出，PD應(yīng)作為ESRD的首選透析方式。 腹膜纖維化致超濾喪失是CAPD患者退出腹膜透析治療的主要原因之一。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)是目前公認(rèn)的作為腹膜纖維化病變中最重要的促發(fā)因子之一，曾有許多研究從不同角度直接阻斷TGF-β1的表達(dá)或活

2、性，可以減少細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的積聚，從而減輕組織纖維化，但是TGF-β1除了致纖維化作用外，還是免疫功能和腫瘤生長(zhǎng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，單純阻斷TGF-β可能到抗組織纖維化的同時(shí)，也會(huì)帶來(lái)多種嚴(yán)重副反應(yīng)，在臨床應(yīng)用受到限制。 結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)是一種新發(fā)現(xiàn)的生長(zhǎng)因子，屬于即刻早期基因CCN(CTGF，cyr61，nov)家族成員。CTGF作為重要的前纖維化標(biāo)志以及TGF-β1的下游效應(yīng)介質(zhì)，與TGF-β1一起參與了眾多組

3、織的ECM合成。CTGF主要介導(dǎo)TGF-β的負(fù)面效應(yīng)，而其正面效應(yīng)卻不由CTGF途徑介導(dǎo)，因此，CTGF是今后抗組織纖維化治療研究的一個(gè)比較理想的作用靶點(diǎn)。最近的研究報(bào)道PD患者腹腔透出液中可檢測(cè)到CTGF，人類(lèi)腹膜間皮細(xì)胞(HPMCs)表達(dá)CTGF，TGF-β刺激使HPMCs合成CTGF增加。因此，CTGF可能參與了長(zhǎng)期PD過(guò)程中PF的形成。 目前CTGF在PD腹膜纖維化中的研究還主要在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，國(guó)內(nèi)外尚未報(bào)道CTGF在P

4、D腹膜中的表達(dá)及其與腹膜纖維化的關(guān)系。本研究在腹膜透析大鼠中，觀察CTGF在腹膜的表達(dá)情況及其與腹膜纖維化的關(guān)系，初步討論CTGF在葡萄糖透析液對(duì)腹膜損害中的作用。 目的：觀察CTGF在腹膜透析大鼠模型腹膜中的表達(dá)情況，及其與腹膜纖維化的幾個(gè)主要指標(biāo)TGF-β1、纖維連接蛋白(FN)、膠原厚度的相關(guān)性，闡明CTGF在PD腹膜纖維化中的作用。 方法：采用雄性成年SD大鼠28只(體重200-240g)，隨機(jī)分為4組，分別是正

5、常對(duì)照組(n=7，未予任何處理)、生理鹽水組(n=7，每日腹腔內(nèi)直接注射0.9％生理鹽水20m1)、低糖組(n=7，每日腹腔內(nèi)直接注射1.5％含糖透析液20m1)、高糖組(n=7，每日腹腔內(nèi)直接注射4.25％含糖透析液20ml)、各組在觀察4周后，測(cè)定腹膜的超濾功能，腹膜平衡試驗(yàn)(PET)，然后處死大鼠，取上腹壁層腹膜標(biāo)本，制片后HE及VG法染色光學(xué)顯微鏡觀察，鏡下測(cè)量腹膜膠原厚度。通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)大鼠腹膜組織中CTGF、TGF

6、-β1、FN蛋白的表達(dá)并分析其相互關(guān)系。從各組的壁層腹膜中提取RNA，采用RT-PCR技術(shù)測(cè)定各組腹膜CTGF、TGF-β1 mRNA的表達(dá)并分析其關(guān)系。 結(jié)果： 1、不同組別腹膜超濾功能的測(cè)定結(jié)果 低糖、高糖組與空白對(duì)照組，生理鹽水組相比較，超濾量均顯著下降，P<0.05；高糖組與低糖組比較，其超濾量明顯減少，P<0.05。 2、不同組大鼠的腹膜平衡試驗(yàn)結(jié)果 D／Pcr的比較：高糖組比正常對(duì)照、

7、生理鹽水組升高，P<0.05。其余組之間兩兩比較無(wú)顯著差異，P>0.05。 D／D<,o>的比較：高糖組比正常對(duì)照組、生理鹽水組明顯下降，P<0.05。低糖組比空白對(duì)照組低，P<0.05；其余組之間兩兩比較無(wú)顯著差異，P>0.05。 3、腹膜膠原厚度比較 高糖組腹膜膠原厚度比與其余各組均增厚，P<0.05；低糖組比正常對(duì)照組增厚，P<0.05；其余組之間兩兩比較無(wú)顯著差異，P>0.05。 4、免疫組織化

8、學(xué)方法檢測(cè)大鼠腹膜組織ePCTGF、TGF-β1、FN的表達(dá)量 高糖組CTGF、TGF-β1、FN蛋白表達(dá)水平顯著高于其他各組，P<0.05；低糖組顯著高于正常對(duì)照組、生理鹽水組，P<0.05。相關(guān)分析示CTGF蛋白表達(dá)量與TGF-β1、FN蛋白表達(dá)量、腹膜膠原厚度均呈正相關(guān)，P<0.05。 5、不同組別大鼠腹膜中CTGF、TGF-β1mRNA的表達(dá) 在正常對(duì)照以及生理鹽水對(duì)照組中，TGF-β 1、CTGFmRN

9、呈低水平表達(dá)。TGF-β1、CTGFmRNA在高糖組中表達(dá)最高，P<0.05。相關(guān)分析示兩者呈正相關(guān)。 結(jié)論： 1、在腹膜透析大鼠中，腹膜透析液、尤其是高濃度葡萄糖透析液能促進(jìn)腹膜的纖維化，損害腹膜的溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)及超濾功能。 2、腹膜透析液、尤其是高糖腹膜透析液能上調(diào)大鼠腹膜中TGF-β1的表達(dá)，促進(jìn)腹膜的纖維化。 3、腹膜透析液、尤其是高糖腹膜透析液，能明顯上調(diào)大鼠腹膜中CTGF的表達(dá)水平，CTGF