結締組織生長因子在大鼠肺動脈高壓血管重構中的表達及作用.pdf

1、目的： 采用左肺切除+野百合堿建立大鼠PAH新生內膜模型，了解該模型肺血管重構模式特點；探討CTGF基因在該模型肺組織中的表達水平和調控在PAH肺血管重構中的作用，以及辛伐他汀減輕PAH肺血管重構的作用機制；并初步分析CTGF促進PASMC增殖、遷移和ECM基因表達在。PAH肺血管重構中的作用機制。 方法： 1．采用單純肺切除(PE)、腹主動脈．腔靜脈分流(A-VF)、野百合堿(MCT)、左肺切除+野百合堿(P+

2、M)4種方法建立大鼠PAH模型，檢測模型大鼠mPAP、RV/LV+S比值、中膜厚度百分比、非肌性小動脈肌化程度和新生內膜形成，比較4種PAH動物模型肺血管重構模式的差異。 2．(1)應用辛伐他汀對左肺切除+野百合堿誘導的PAH模型進行干預，觀察模型肺血流動力學改變，并采用血管阻塞計分、非肌性小動脈肌化程度等體視學指標評價藥物對肺血管重構的影響程度。 (2)采用原位雜交、熒光定量RT-PCR檢測CTGF mRNA的表達，采

3、用免疫組化和Western Blot檢測CTGF蛋白的表達。 (3)應用Masson染色和羥脯氨酸測定觀察膠原合成。 (4)應用TUNEL染色檢測肺血管細胞凋亡。 (5)應用PCNA免疫組化染色檢測細胞增殖情況。 (6)測定血管阻塞計分了解肺血管狹窄情況。 (7)應用辛伐他汀干預后進行生存率分析。 3．在體外應用重組CTGF作用于培養(yǎng)PASMC，檢測CTGF對PASMC增殖、遷移、細胞骨架

4、改變，以及膠原和纖維連接蛋白基因表達的影響。 結果： 1．在P+M組(肺切除術后5周)右肺腺泡內血管出現(xiàn)新生內膜病變，其它組均沒有新生內膜病變形成。P+M組動物出現(xiàn)了嚴重的右心室肥大，動脈中膜明顯增厚，平均肺動脈壓(mPAP)和無肌性血管肌化程度顯著增加；A-VF、PE和MCT組僅形成輕．中度的右心室肥大、mPAP升高和小動脈肌化。 2．與正常大鼠比較，應用原位雜交和免疫組化檢測顯示大鼠PAH新生內膜模型CTGF

5、 mRNA和蛋白表達增加，且主要表達在PASMC、間質的巨噬細胞，熒光定量RT-PCR和Western Blot檢測顯示ET-1mRNA、CTGF mRNA和蛋白水平明顯較對照組大鼠有顯著升高，且膠原合成也較對照組大鼠明顯增加。給予辛伐他汀干預后，PAH大鼠ET-1mRNA、CTGF mRNA 和蛋白表達水平明顯下調，膠原合成減少；肺血管壁細胞增殖減少，細胞凋亡率增加；減輕非肌性小動脈肌化程度和血管阻塞，抑制新生內膜形成，且抑制右室肥大

6、和動脈中膜肥厚，緩解PAH。辛伐他汀早期和晚期干預將PAH大鼠生存率由75％(PMV<,1-35>)和66．67％(PMV<,21-35>)分別提高至100％(PMS<,1-35>)和83．33％(PMS<,21-35>)。 3．體外實驗中，重組CTGF促進PASMC增殖、遷移；促進PASMC細胞周期進程，不增加PASMC凋亡；促進Ⅰ、Ⅳ型膠原-α1和纖維連接蛋白-1 mRNA表達；可短暫改變PASMC細胞骨架。 結論：

7、 1．4種動物模型中，僅P+M能成功誘導大鼠PAH新生內膜模型，該模型能更好地模擬人類嚴重PAIl的病理改變，是研究梗阻性PAH更為適用的動物模型。 2．CTGF表達上調可能在PAH肺血管重構過程中起重要作用，辛伐他汀可能通過下調CTGF基因表達減輕肺血管重構。 3．辛伐他汀通過抑制肺血管平滑肌細胞增殖和誘導凋亡阻止P+M誘導的PAH大鼠肺血管重構的形成。 4．CTGF促進PASMC增殖、遷移、細胞骨架改