谷氨酰胺聯(lián)合5-氟尿嘧啶、絲裂霉素C、表阿霉素、草酸鉑對胃癌細(xì)胞株MGC-803的抑制作用、藥物間相互作用及其機(jī)制研究.pdf

1、研究目的：研究胃癌化療藥物5-氟尿嘧啶(5-Fu)、絲裂霉素c(MMC)、表阿霉素(EPI)、草酸鉑(L-OHP)與谷氨酰胺(GLN)間的相互作用及其機(jī)制，闡明藥物間關(guān)系，為選擇合理胃癌治療方案提供依據(jù)。 研究方法：采用MTT法檢測藥物對細(xì)胞抑制作用的時(shí)效及量效關(guān)系，應(yīng)用 Chou-Talalay聯(lián)合指數(shù)法(即中效原理)判定兩藥合用相互作用關(guān)系；應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測藥物對細(xì)胞周期分布的影響；透射電鏡觀測藥物作用后細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改

2、變及藥物作用的結(jié)構(gòu)靶點(diǎn)；Anncxin V／PI雙染流式細(xì)胞術(shù)、Hoechst 33258染色熒光顯微術(shù)觀察藥物作用后細(xì)胞調(diào)亡情況；Western blot法檢測GLN、化療藥物對于影響化療效果的靶蛋白表達(dá)的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1．GLN無明顯的刺激腫瘤生長的作用；GLN主要表現(xiàn)為腫瘤生長抑制作用，此作用呈時(shí)間、劑量依賴性； 2．MMC的抗腫瘤活性主要表現(xiàn)為時(shí)間依賴性，聯(lián)合應(yīng)用GLN，呈較弱的拮抗作用(1.01<

3、CI<1.29)；：MMC有明顯的S期阻滯作用，導(dǎo)致細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)增高；GLN可以降低由MMC引起的PI值增高，尤其是大劑量合用時(shí)效果顯著。GLN可以加重MMC引起的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷，并加重凋亡。GLN可以通過下調(diào)由MMc上調(diào)的NF-κB表達(dá)、下調(diào)VEGF的表達(dá)，來增強(qiáng)化療敏感性、逆轉(zhuǎn)化療耐藥性； 3.5-Fu的抗腫瘤活性主要表現(xiàn)為時(shí)間依賴性，故小劑量持續(xù)給藥較為合理；聯(lián)合應(yīng)用GLN，小劑量聯(lián)合時(shí)呈拮抗作用，大劑量聯(lián)合時(shí)呈

4、協(xié)同作用；5-Fu對細(xì)胞周期及細(xì)胞增值指數(shù)(PI)影響較小；合用GLN后，不改變周期及PI值。GLN可以加重5-Fu引起的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷，并加重壞死。GLN可以通過下調(diào)由5-Fu上調(diào)的NF-κB表達(dá)、聯(lián)合下調(diào)VEGF的表達(dá)，來增強(qiáng)化療敏感性、逆轉(zhuǎn)化療耐藥性； 4.EPI具有良好的抗腫瘤活性，呈時(shí)間及劑量依賴性，聯(lián)合應(yīng)用GLN，小劑量聯(lián)合時(shí)呈協(xié)同作用，大劑量聯(lián)合時(shí)呈拮抗作用；EPI不同濃度、不同作用時(shí)間可表現(xiàn)為G2/M期阻滯和S

5、期阻滯，PI值增高；合用GLN后，可以減低PI值，尤其是大劑量合用時(shí)作用顯著；GLN可以加重EPI引起的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷，并加重凋亡發(fā)生。GLN通過下調(diào)由EPI上調(diào)的Bcl-2、NF-κB表達(dá)、聯(lián)合下調(diào)VEGF的表達(dá)，來加重凋亡、增強(qiáng)化療敏感性、逆轉(zhuǎn)化療耐藥性； 5.L-OHP的抗腫瘤活性呈時(shí)間及劑量依賴性；聯(lián)合應(yīng)用GIN，小劑量聯(lián)合時(shí)呈協(xié)同作用，大劑量聯(lián)合時(shí)呈較強(qiáng)的拮抗作用；小劑量L-OHP引起輕度S期阻滯和G2/M期阻滯，中

6、等劑量引起明顯的S期阻滯作用，大劑量無明顯周期阻滯現(xiàn)象；中、低劑量L-OHP可顯著提高PI值，而大劑量時(shí)無此作用；合用GLN對細(xì)胞周期、PI值無明顯影響；GLN可以加重EPI引起的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷，并加重凋亡發(fā)生。GLN通下調(diào)由L-OHP上調(diào)的Bcl-2、NF-κB表達(dá)、聯(lián)合下調(diào)VEGF的表達(dá)，來加重凋亡、增強(qiáng)化療敏感性、逆轉(zhuǎn)化療耐藥性； 研究結(jié)論： 1.GLN無明確刺激腫瘤細(xì)胞生長的作用，GLN用于腫瘤病人是安全的；

7、 2.使用MMC時(shí)，可以考慮同時(shí)使用GLN，以增強(qiáng)MMC細(xì)胞殺傷效果、減低細(xì)胞增值指數(shù)； 3.較大劑量5-Fu與GLN同時(shí)應(yīng)用時(shí)藥效協(xié)同，同時(shí)GLN可以加重腫瘤細(xì)胞的損傷，并降低VEGF表達(dá)，有利于腫瘤治療； 4.較大劑量EPI與GLN合用時(shí)藥效協(xié)同，同時(shí)GLN可增加凋亡的發(fā)生、降低細(xì)胞增值指數(shù)、加重腫瘤細(xì)胞的損傷： 5.L-OHP與GLN合用時(shí)，劑量不應(yīng)過大，此時(shí)藥效協(xié)同；同時(shí)GLN可以增加凋亡的發(fā)生、加重腫瘤