TSP-1、VEGF表達(dá)及Th17相關(guān)炎癥因子與原發(fā)性肝癌關(guān)系的研究.pdf

1、目的:
　　1.探討凝血酶敏感蛋白-1（TSP-1）及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)血清及組織學(xué)表達(dá)與原發(fā)性肝癌進(jìn)展的關(guān)系;
　　2.與肝癌標(biāo)志物甲胎蛋白(AFP)進(jìn)行比較，評(píng)價(jià)TSP-1及VEGF對(duì)肝癌早期診斷的價(jià)值。
　　3.探討Th17相關(guān)炎癥細(xì)胞因子IL-1b、IL-6、IL-10、IL-12p70、IL-17A、IL-22、IL-23與原發(fā)性肝癌的關(guān)系，評(píng)價(jià)其對(duì)原發(fā)性肝癌診斷的意義。
　　方法:
　

2、　1.收集肝癌組血清標(biāo)本88例及肝癌組織切片53例分別進(jìn)行TSP-1和VEGF的血清濃度檢測及免疫組化染色，其中Ⅰ期肝癌血清標(biāo)本20例、組織切片7例，Ⅱ期肝癌血清標(biāo)本25例、組織切片18例，Ⅲ期肝癌血清標(biāo)本43例、組織切片28例。收集健康對(duì)照組血清40例及肝癌癌傍正常肝組織30例。從上述收集的肝癌血清標(biāo)本中隨機(jī)抽取51例，其中Ⅰ期肝癌血清標(biāo)本10例，Ⅱ期肝癌血清標(biāo)本13例，Ⅲ期肝癌血清標(biāo)本28例，從健康對(duì)照組血清隨機(jī)抽取29例進(jìn)行Th1

3、7相關(guān)炎癥細(xì)胞因子的檢測。
　　2.TSP-1和VEGF血清濃度的檢測采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)進(jìn)行檢測;
　　3.肝癌組織切片及癌傍組織進(jìn)行TSP-1及VEGF免疫組化染色，采用
　　4.即用型非生物素免疫組化方法。
　　5.Th17相關(guān)炎癥細(xì)胞因子IL-1b、IL-6、IL-10、IL-12p70、IL-17A、IL-22、IL-23檢測采用液態(tài)懸浮芯片技術(shù)（Luminex xMAP）進(jìn)行檢

4、測，在Luminex200閱讀儀上讀取數(shù)據(jù)。
　　6.TSP-1、VEGF與各細(xì)胞因子在肝癌組和健康對(duì)照組之間的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);Ⅰ期肝癌組、Ⅱ期肝癌組、Ⅲ期肝癌組及血清對(duì)照組之間的相互比較用SNK-q檢驗(yàn)。應(yīng)用受試者診斷特征曲線(ROC)得到曲線下面積評(píng)估TSP-1、VEGF、AFP及細(xì)胞因子的預(yù)測效能;組織學(xué)差異比較采用有序分組資料的線性趨勢檢驗(yàn)方法;所有數(shù)據(jù)采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為P＜0.05。

5、
　　結(jié)果:
　　1.肝癌組TSP-1血清濃度明顯低于正常對(duì)照組(P＜0.05);肝癌組VEGF血清濃度明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.05)。
　　2.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期肝癌組血清TPS-1濃度均低于健康對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01），Ⅲ期肝癌組血清TPS-1濃度低于Ⅰ期肝癌組和Ⅱ期肝癌組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），但Ⅰ期肝癌組和Ⅱ期肝癌組之間血清TPS-1濃度無顯著性差異(P＞0.05);正常對(duì)照組

6、、Ⅰ期肝癌組，Ⅱ期肝癌組各組之間血清VEGF濃度無顯著性差異（均P＞0.05），但Ⅲ期肝癌組血清VEGF濃度高于正常對(duì)照組、Ⅰ期肝癌組、Ⅱ期肝癌組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。
　　3.以健康對(duì)照組和肝癌組血清TSP-1、VEGF及AFP的濃度為變量做ROC曲線，其曲線下面積TSP-1為0.893(P＜0.05)，AFP為0.712(P＜0.05)，而VEGF為0.568(P＞0.05)，說明TSP-1及AFP作為肝癌血

7、清標(biāo)志物具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而VEGF作為肝癌血清標(biāo)志物沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。根據(jù)ROC曲線下面積大小顯示TSP-1的診斷能力較AFP強(qiáng)，且敏感度較AFP高。
　　4.分別以健康對(duì)照組與Ⅰ期肝癌組的血清TSP-1和AFP的含量為變量做ROC曲線，分析顯示TSP-1和AFP作為標(biāo)志物診斷早期肝癌，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而VEGF作為早期診斷則沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TSP-1與AFP對(duì)應(yīng)的曲線下面積分別為（0.883，P＜0.05）和(0.821，P＜0

8、.05)，TSP-1大于AFP說明TSP-1早期診斷價(jià)值優(yōu)于AFP，選擇其曲線上約登指數(shù)最大值時(shí)為截?cái)帱c(diǎn)，TSP-1臨界值為132.11μg/ml，敏感度95％特異度70.0％，AFP臨界值為19.15ng/ml，敏感度85.0％，特異度75.0％.
　　5.免疫組化顯示TSP-1與VEGF均表達(dá)在肝癌細(xì)胞及正常肝細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。在肝癌細(xì)胞和正常肝細(xì)胞內(nèi)均可以發(fā)現(xiàn)TSP-1的陽性表達(dá)，但正常肝細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)要強(qiáng)于肝癌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。在肝

9、癌細(xì)胞和正常肝細(xì)胞內(nèi)均可以發(fā)現(xiàn)VEGF的陽性表達(dá)，但肝癌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)要強(qiáng)于肝細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。TSP-1與VEGF組織學(xué)表達(dá)強(qiáng)度與原發(fā)性肝癌進(jìn)展均存在相關(guān)關(guān)系且為線性關(guān)系(P＜0.05):TSP-1在肝癌組織的表達(dá)隨著原發(fā)性肝癌的進(jìn)展而減弱;VEGF在肝癌組織的表達(dá)隨著原發(fā)性肝癌的進(jìn)展而增強(qiáng)。
　　6.分別對(duì)IL-1b、IL-6、IL-10、IL-12p70、IL-17A、IL-22、IL-23進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，7個(gè)細(xì)胞因子中僅IL-

10、17A肝癌組與正常對(duì)照組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其他6個(gè)細(xì)胞因子肝癌組與正常對(duì)照組之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　7.以IL-17A的血清濃度為變量做ROC曲線，評(píng)價(jià)其作為肝癌血清診斷標(biāo)志物的可能性。其曲線下面積(AUC)為0.882(P＜0.05)，說明IL-17A作為肝癌血清標(biāo)志物具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，選擇IL-17A截?cái)帱c(diǎn)為11.5μg/ml，約登指數(shù)最大，其敏感度為68.6％，特異度為93.1％。

11、r>　　結(jié)論:
　　1.肝癌患者血清中TSP-1濃度隨著肝癌的進(jìn)展逐漸降低，而VEGF濃度隨著肝癌的進(jìn)展逐漸增高，與組織學(xué)表達(dá)一致;
　　2.TSP-1對(duì)肝癌及早期肝癌具有診斷價(jià)值。TSP-1對(duì)肝癌的診斷效能較AFP強(qiáng);VEGF對(duì)于肝癌及早期肝癌的診斷價(jià)值非常有限。
　　3.Th17相關(guān)炎癥細(xì)胞因子IL-1b、IL-6、IL-10、IL-12p70、IL-17A、IL-22、IL-23中僅IL-17A肝癌組與正常對(duì)照組