廣西北部地區(qū)美味獼猴桃莖的HPLC指紋圖譜及其揮發(fā)油的GC-MS研究.pdf

1、目的：（1）建立廣西北部地區(qū)美味獼猴桃莖藥材的HPLC色譜指紋圖譜，得到其對(duì)照?qǐng)D譜，為科學(xué)評(píng)價(jià)與有效控制廣西北部地區(qū)美味獼猴桃質(zhì)量提供新方法。在建立的HPLC色譜指紋圖譜條件下，對(duì)美味獼猴桃莖與根藥材進(jìn)行比較，以考察指紋圖譜的鑒別效果，并簡(jiǎn)要分析兩者的異同。
　　（2）通過氣相色譜——質(zhì)譜聯(lián)用法采集美味獼猴桃莖與根揮發(fā)油的總離子流圖，并比較兩者之間的異同。
　　方法：（1）采用不同提取溶劑、不同提取方法的提取效果，選擇提取成

2、分較多，提取率較高的提取條件。色譜條件本文選用合適的色譜柱及檢測(cè)波長(zhǎng)，調(diào)整流動(dòng)相的組成、配比、流速，調(diào)節(jié)柱溫，使色譜圖符合指紋圖譜研究的要求。在已確定的色譜條件下，考察指紋圖譜中槲皮苷的分離度和理論塔板數(shù)。取同一份供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄保留時(shí)間和峰面積。取同一份供試品溶液分別于0、4、6、8、12、24h進(jìn)樣，記錄保留時(shí)間和峰面積。取同一來源美味獼猴桃莖供試品5份，平行制備樣品溶液，進(jìn)樣，記錄保留時(shí)間和峰面積。選擇不同來源廣西北

3、部地區(qū)美味獼猴桃莖藥材16批，制備供試品溶液，進(jìn)行指紋圖譜分析。使用“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)A版”進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，對(duì)16批美味獼猴桃莖藥材指紋圖譜進(jìn)行比較分析。在已建立的指紋圖譜條件下，比較美味獼猴桃莖與根的HPLC色譜圖整體外觀。將美味獼猴桃莖與根各自的對(duì)照指紋圖譜進(jìn)行比較，比較各自的共有峰個(gè)數(shù)以及各自共有峰的相對(duì)含量。通過“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)A版”，比較美味獼猴桃莖與根藥材指紋圖譜間的相似性。
　?。?）通過

4、氣相色譜——質(zhì)譜聯(lián)用法采集美味獼猴桃莖與根藥材的總離子流圖，并比較兩者之間的異同。用水蒸汽蒸餾法提取美味獼猴桃莖與根藥材的揮發(fā)性成分，比較兩者揮發(fā)性成分的含量。將美味獼猴桃莖與根的揮發(fā)油經(jīng)氣相色譜——質(zhì)譜聯(lián)用儀分析，色譜和質(zhì)譜信息經(jīng)解析鑒定后，可得到美味獼猴桃莖與根揮發(fā)油中各自的化學(xué)成分組成及相對(duì)含量。通過這些信息，比較莖與根揮發(fā)油中主要化學(xué)成分組成及其相對(duì)含量。
　　結(jié)果：（1）供試品提取條件：藥材1.0g加75％乙醇50ml超

5、聲提取60min，過濾，濾液揮干，加水使其懸浮后用乙酸乙酯萃取四次為佳，其峰信息較多，保留時(shí)間有較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性。色譜條件以Thermo Hypersil BDS C18(5μm,4.6mm×250mm))，乙腈—0.1%磷酸為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫；流速為1 ml/min，柱溫為20℃；檢測(cè)波長(zhǎng)296nm，進(jìn)樣量20μl。在上述色譜條件下，槲皮苷的保留時(shí)間約為32分鐘，與其它色譜峰的得分離度均大于1.5，確定最低理論塔板數(shù)為2700。

6、精密度試驗(yàn)結(jié)果表明：儀器的精密度良好。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明：供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)呈現(xiàn)良好的穩(wěn)定性。重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表明：實(shí)驗(yàn)方法的重復(fù)性良好。建立了16批不同來源廣西北部地區(qū)美味獼猴桃莖藥材的指紋圖譜，并生成了其對(duì)照指紋圖譜。通過相似度軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析可知：16批美味獼猴桃莖藥材指紋圖譜有良好的相似性。在該色譜條件下，美獼猴桃莖與根存在較明顯的差異，容易辨認(rèn)。在根、莖藥材各自生成的對(duì)照指紋圖譜中，根的共有峰為27個(gè)，莖的為28個(gè)，其中莖與

7、根共有峰為15個(gè)。運(yùn)用相似度軟件將美味獼猴桃莖與根進(jìn)行比較，結(jié)果表明：莖與根藥材的相似度相差較大，建立的高效液相指紋圖譜色譜條件可以用于鑒別。
　　（2）美味獼猴桃莖與根揮發(fā)油的相似之處：兩者揮發(fā)油的含量相近；揮發(fā)油化學(xué)成分類別相似，均含有酯類、烷烴類、烯烴類、酚類和酮類成分；揮發(fā)油中共有的成分為：2,4-雙(1,1-二甲基乙基)苯酚、十六烷、十九烷和3,7-二甲基-3-羥基-1,6-辛二烯。美味獼猴桃莖與根揮發(fā)油的不同之處：揮發(fā)

8、油化學(xué)成分中除4種相同外，其他均不同；各類成分在莖與根揮發(fā)油中的相對(duì)含量有所不同。
　　結(jié)論：本文建立了廣西北部地區(qū)美味獼猴桃莖藥材的HPLC指紋圖譜，得到其對(duì)照?qǐng)D譜，方法重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和精密度良好，有助于美味獼猴桃藥材的標(biāo)準(zhǔn)化種植及藥材的質(zhì)量控制。美味獼猴桃莖與根藥材在相同的色譜條件下存在較明顯的差異，建立的指紋圖譜條件可用于兩者的鑒別；得到了莖與根的15個(gè)共有峰，可為今后結(jié)合成分和藥理研究，科學(xué)選擇藥用部位打下基礎(chǔ)。