番鴨IGF-I基因的全長cDNA克隆、表達(dá)及與產(chǎn)蛋性能的關(guān)聯(lián)分析.pdf

1、為研究番鴨的就巢機(jī)理，本試驗(yàn)選用番鴨為試驗(yàn)樣本，選擇番鴨胰島素樣生長因子1（Insulin like growth factor-1，IGF-1)基因?yàn)檠芯繉?duì)象，通過逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）技術(shù)和cDNA末端快速擴(kuò)增（RACE）技術(shù)克隆獲得番鴨IGF-1基因cDNA全序列；應(yīng)用多種生物信息學(xué)軟件對(duì)獲得的番鴨IGF-1基因cDNA序列及其編碼的氨基酸序列進(jìn)行分析，并通過同源建模對(duì)翻譯的蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)；根據(jù)克隆所得的番

2、鴨IGF-1基因cDNA的全長序列，針對(duì)其保守區(qū)設(shè)計(jì)特異性引物，并以鴨肌動(dòng)蛋白（β-Actin）基因（EF667345.1）為內(nèi)參基因，采用SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-FQPCR）方法對(duì)IGF-1基因在非就巢期與就巢期的番鴨不同組織的差異性表達(dá)進(jìn)行研究；利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性（PCR-SSCP）方法檢測(cè)番鴨IGF-1基因的多態(tài)性，并分析其多態(tài)性與番鴨產(chǎn)蛋性能的關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)果如下：
　　1.

3、從番鴨肝臟中首次成功得到IGF-1基因的cDNA序列全長960bp，編碼區(qū)（CDS）為462bp，編碼153個(gè)氨基酸；序列比對(duì)和同源性分析顯示，在核苷酸水平，該基因與灰雁（Anser)的相似度最高，為99％，與原雞（Gallus gallus）和火雞（Meleagris gallopavo）的同源性為98%；在氨基酸水平，與灰雁的同源性達(dá)99%；蛋白結(jié)構(gòu)分析結(jié)果表明IGF-1含有1個(gè)Insulin/IGF/Relaxin family結(jié)

4、構(gòu)域，具有1個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)，使用PredictProtein在線工具進(jìn)行二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)蛋白有30.07%helix，0.65%strand，69.28%loop，同源建模得到該蛋白的三維結(jié)構(gòu)。
　　2. IGF-1基因在番鴨肝臟中的表達(dá)最高，依次為心臟、垂體、下丘腦、卵巢、脾臟、腎臟、肺臟、胰臟、腺胃、十二指腸，在肌胃中的表達(dá)量最低。在非就巢的番鴨群體中， IGF-1基因在下丘腦、垂體、卵巢的表達(dá)高于就巢期的番鴨群體，差異極顯著（P