藍莓粗提物及其各組分對食源性致病菌的抑菌作用研究.pdf

1、杜鵑花科越橘屬的藍莓含有大量對人類健康有益的物質(zhì)，包括抗菌成分、抗氧化物、鞣酸、葉酸和食用纖維等。研究表明，藍莓對體外革蘭氏陽性細菌、陰性細菌都有明顯的抑制活性作用。食源性致病菌污染作為我國頭號的食品安全問題，引起人們的廣泛關(guān)注，人們也越來越青睞于無毒、無害、無副作用的天然食品抑菌劑。
　　本文以中國栽培藍莓品種，北高叢藍莓Elliott，為研究對象，結(jié)合活性物質(zhì)提取技術(shù)，微生物培養(yǎng)鑒定技術(shù)，體外藥敏試驗，體內(nèi)動物試驗和模擬樣品試

2、驗等研究方法，對藍莓粗提物及其各分離組分的體外及體內(nèi)的抑菌活性進行系統(tǒng)的研究。研究內(nèi)容包括比較藍莓粗提物對常見的食源性致病菌的抑制性差異，藍莓粗提物的各分離組分對最敏感菌株的抑菌效果，探討藍莓粗提物在實驗動物腸道內(nèi)的抗微生物活性以及對模擬樣品中敏感菌株的抑制效果。
　　首先采用二倍倍比稀釋法測定藍莓粗提物體外抑菌活性，表明藍莓粗提物對三株副溶血性弧菌的抑菌效果明顯強于單增李斯特菌、金黃色葡萄球菌和腸炎沙門氏菌。當(dāng)藍莓粗提物濃度10

3、0mg/mL時，能完全抑制副溶血性弧菌ATCC33846、ATCC33847、ATCC17802的生長。而藍莓粗提物濃度達到400 mg/mL時，能完全殺死單增李斯特菌和金黃色葡萄球菌。對于腸炎沙門氏菌，藍莓粗提物濃度達到800 mg/mL時，才能抑制其生長。
　　選用25只5天齡的SPF級ICR infant雄性小鼠進行體內(nèi)抑菌實驗。將實驗小鼠隨機分成5個處理組（每組5個重復(fù)），菌液對照處理組，同時灌胃處理菌液與藍莓粗提物（10

4、0mg/ml，200mg/ml）的混合物，延遲灌胃處理組（先做菌液灌胃處理，12h后灌胃藍莓粗提物（100mg/ml，200mg/ml））。實驗24h后，處死實驗小鼠，取其小腸組織進行稀釋涂板計數(shù)。結(jié)果顯示，當(dāng)灌胃處理100mg/mL的藍莓粗提物時，小鼠腸道內(nèi)檢測出的菌數(shù)明顯低于處理50mg/mL的藍莓粗提物。當(dāng)處理相同的藍莓粗提物濃度時，藍莓和菌液同時灌胃處理的小鼠小腸組織內(nèi)檢測到的副溶血性弧菌的數(shù)量明顯低于藍莓處理液延遲處理的小鼠腸

5、道內(nèi)的定殖菌數(shù)。實驗結(jié)果表明，藍莓粗提物能影響副溶血性弧菌在小鼠腸道內(nèi)的定殖，從而減少副溶血性弧菌造成的風(fēng)險。
　　其次采用頂空固相微萃取與氣質(zhì)聯(lián)用法分析了藍莓粗提物中的揮發(fā)性成分與含量。通過比較不同萃取溫度下獲得的藍莓粗提物中揮發(fā)性組分的種類，得出50℃為最佳萃取溫度。且在該萃取溫度下可最大限度吸附揮發(fā)性成分，有利于對藍莓粗提物中揮發(fā)性組分作近一步分析。藍莓粗提物中的揮發(fā)性物質(zhì)主要為構(gòu)成藍莓獨特香氣成分的物質(zhì)，以及一些含量較豐富

6、的二氯苯、柏木腦和一些酚酸類物質(zhì)等，這些物質(zhì)使藍莓具有獨特的功能特性，如抗氧化活性和抑菌作用等。
　　通過醇提法獲得藍莓粗提物后，將粗提物用C18色譜柱進行分離純化，得到糖和有機酸的混合物，酚類物質(zhì)，花青素類物質(zhì)這三大部分。分別通過苯酚-硫酸法，福林-酚法和pH差示法檢測藍莓粗提物和其分離組分中的總糖含量、總酚含量和花青素含量。通過測定，藍莓粗提物中的總糖、總酚和花青素含量分別為9.35％，337.1 mg GAE/100g和14

7、8.54 mg/100g。而分離出來的有機酸和糖的混合物中的總糖含量為6.27%，酚類物質(zhì)中的總酚含量為48.7 mg GAE/100g，花青素類物質(zhì)中的總酚含量為191.3 mg GAE/100g，花青素類物質(zhì)中的花青素含量為119.22 mg/100g，很好的達到了分離的效果。
　　將藍莓粗提物及其分離成分分別作用于副溶血性弧菌混菌時，當(dāng)濃度達到100mg/mL時，可以完全抑制副溶血性弧菌混合菌的生長。當(dāng)有機酸和糖的混合物中糖

8、的濃度達到0.078%和酚類物質(zhì)中總酚含量為0.78mg/g時，可以使副溶血性弧菌混菌的菌數(shù)低于檢測線以下。當(dāng)花青素類物質(zhì)中花青素含量為1.86mg/100g時，可以使副溶血性弧菌混菌菌數(shù)減少6.90 logs。
　　最后初步探討了藍莓粗提物在模擬樣品（三文魚）中對副溶血性弧菌的影響。將不同濃度梯度的藍莓粗提物分別處理人工侵染副溶血性弧菌的三文魚樣品，30℃培養(yǎng)不同的時間后，檢測菌數(shù)變化及進行感官評價處理。實驗結(jié)果表明，當(dāng)藍莓提取