非小細胞肺癌中TMS1基因甲基化檢測及臨床意義.pdf

1、背景：肺癌是當前世界各地最常見的惡性腫瘤之一，目前認為它的發(fā)生是多因素、多階段、多基因異常累積的結(jié)果。導(dǎo)致基因異常的原因包括：基因突變，基因缺失，基因表觀遺傳學(xué)改變等等。隨著對腫瘤發(fā)生機制分子生物學(xué)研究的不斷深入，表觀遺傳學(xué)中基因啟動子區(qū)的異常甲基化在腫瘤發(fā)生中的作用越來越成為人們關(guān)注的焦點。正常細胞內(nèi)，啟動子區(qū)的CpG島呈非甲基化狀態(tài)，占大部分的散在分布的CpG二核苷酸多發(fā)生甲基化。而腫瘤細胞中，總體甲基化水平比正常細胞低，但同時伴有

2、某些CpG島甲基化程度增高。腫瘤細胞中CpG島變?yōu)榧谆癄顟B(tài)后，其相關(guān)基因的表達亦被關(guān)閉。因此認為DNA甲基化狀態(tài)改變是抑癌基因失活的方式之一，是致癌的一個關(guān)鍵因素。TMS1是Masumoto和Conway分別研究白血病和乳腺癌時分離鑒定的一個新型的促凋亡基因，可以通過caspase介導(dǎo)，抗腫瘤免疫，抑制NF-k B的活性等多種途徑促進細胞的凋亡，也是甲基化誘導(dǎo)基因沉默事件中第一個被發(fā)現(xiàn)的基因，在多種腫瘤中均有檢測到其甲基化的報道。

3、 目的: 從基因水平檢測TMS1在NSCLC腫瘤組織及癌旁正常組織中的甲基化狀況，從蛋白水平檢測TMS1在NSCLC腫瘤組織及癌旁正常組織中的表達情況，分析兩者與NSCLC的病理分型、臨床分期等臨床病理資料的相關(guān)性，以及TMS1基因的甲基化水平與蛋白表達水平之間的關(guān)系。 方法: 從肺組織標本中提取DNA，經(jīng)過亞硫酸氫鈉的修飾，DNA純化系統(tǒng)的純化，最終分別用甲基化和非甲基化引物進行PCR擴增，檢測50例非小細

4、胞肺癌及50例癌旁正常組織中TMS1基因的甲基化率。我們還用抗生物素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物法(SABC法)檢測上述組織中的TMS1蛋白表達情況。 結(jié)果: 50例NSCLC腫瘤組織中有20例檢測到了TMS1基因啟動子的甲基化，檢出率為40％，在癌旁正常組織中沒有檢測到甲基化，兩者之間的差異有顯著性(P＜0.05)。50例癌旁正常組織中均可檢測到TMS1蛋白的完全表達，而有36例(72％)NSCLC腫瘤組織標本蛋白表達下