室間隔缺損血清候選蛋白標志物FN驗證研究.pdf

1、先天性心臟病(Congenital Heart Disease,CHD)是人類最為常見的先天性畸形,是嬰幼兒期非感染死亡的首位病因。而室間隔缺損(ventricular septal defect,VSD)是CHD中最為常見的一種先天性心臟畸形,在出生缺陷中占有重要地位。VSD的病因和發(fā)病機制十分復雜,可能涉及多種因素、多個基因和多條信號通路的改變,以往的研究主要集中在環(huán)境危險因素、遺傳基因等領域,但是要完整了解VSD發(fā)生的機制,必須要

2、了解心臟在異常分化發(fā)育的過程中與之密切相關(guān)蛋白質(zhì)組及其功能。我們前期研究應用同位素標記相對和絕對定量(iTRAQ)技術(shù)結(jié)合LC-MALDI-TOF/TOF方法篩選出21種與VSD相關(guān)的血清差異表達蛋白質(zhì),其中VSD組較健康對照組表達量上調(diào)≥1.5倍的蛋白質(zhì)有13種,下調(diào)≤0.67倍的蛋白質(zhì)有8種。根據(jù)鑒定到肽段的匹配、置信度,纖維連接蛋白(Fibonectin,FN)很可能作為VSD患者血清候選蛋白標志物。本課題擬應用免疫印跡法(Wes

3、tern blot,WB)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)技術(shù)對前期工作鑒定到的VSD患者血清候選蛋白標志物FN進行表達驗證,然后對其進行生物信息學分析,從蛋白組學角度探索VSD的發(fā)病機制,同時為應用生物標志物在孕早期診斷CHD做出基礎工作。
　　目的:驗證纖維連接蛋白(Fibronectin,FN)作為室間隔缺損血清蛋白標志物的可能性并對其進行生物信息學分析。<

4、br>　　方法:收集室間隔缺損(Ventricular septal defect,VSD)組、房間隔缺損(Atrial septal defect,ASD)組、法洛四聯(lián)癥(Tetralogy of Fallot,TOF)組和健康體檢組血清樣本各20例,應用免疫印跡法(Western blot,WB)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測血清樣本中FN表達水平;利用生物信

5、息學的方法對FN的基本理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)、功能、代謝途徑,網(wǎng)絡調(diào)控等方面進行全面分析。
　　結(jié)果:1.免疫印跡法檢測結(jié)果顯示,FN在VSD組、ASD組、TOF組和健康體檢組血清中均能檢測到,但在VSD組中的表達水平明顯高于其它三組(p<0.05)。2.ELISA檢測顯示VSD組患者血清中FN濃度為(67.08±27.67)ug·L-1,ASD組患者為(37.65±15.07)ug·L-1、TOF組患者為(28.08±11.24)ug·

6、L-1、健康體檢組為(31.15±11.18)ug·L-1,四組間差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05);進一步進行兩兩比較,VSD組與其它三組差異均有統(tǒng)計學意義(p<0.05),而其它三組差異均無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。3.生物信息學分析發(fā)現(xiàn)FN是分子量為250kDa亞單位組成的糖蛋白二聚體,是細胞外基質(zhì)中重要的細胞粘附分子,它的一條氨基酸鏈含有2386個氨基酸,262624.5Da,pI=5.46,具有調(diào)節(jié)細胞粘附、增殖、分化,促進細