室間隔缺損血清標(biāo)志蛋白質(zhì)的篩查和鑒定研究.pdf

1、目的:篩查出室間隔缺損(ventricular septal defect,VSD)患者的血清標(biāo)志蛋白質(zhì),并對其進(jìn)行分離、純化和鑒定,明確其身份,探討其生理功能與心臟發(fā)育的關(guān)系。
　　方法:(1)室間隔缺損血清標(biāo)志蛋白質(zhì)的篩查:采集30例VSD患者和30例健康對照者的血清,應(yīng)用表面增強(qiáng)激光解析及電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(SELDI-TOF-MS)檢測兩組人群的血清蛋白質(zhì)表達(dá)譜并分析差異蛋白質(zhì)。數(shù)據(jù)分析分別由Biomarker Wizard

2、和Biomarker Parrern兩個(gè)軟件完成。(2)室間隔缺損血清標(biāo)志蛋白質(zhì)的分離和鑒定:應(yīng)用聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)分離差異蛋白質(zhì),液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS)進(jìn)一步分離并鑒定差異蛋白質(zhì),對目的蛋白質(zhì)進(jìn)行生物信息學(xué)分析,闡述其結(jié)構(gòu)和功能。
　　結(jié)果:室間隔缺損血清標(biāo)志蛋白質(zhì)的篩查結(jié)果:(1)在分子量2000-20000Da范圍,VSD組與對照組表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)的蛋白質(zhì)有15個(gè),其中6個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)上

3、調(diào),9個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)下調(diào)。(2)分子量為5419Da、5640Da、7779Da、15141 Da和15884Da的蛋白質(zhì)在VSD組與對照組的相對表達(dá)比值大于2,其中分子量為15141Da和15884Da的蛋白質(zhì)相對表達(dá)比值大于5。室間隔缺損血清標(biāo)志蛋白質(zhì)的分離和鑒定結(jié)果:(1)聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)分離出VSD組在15KDa左右與對照組存在明顯差異蛋白質(zhì)條帶。(2)電場軌道阱回旋共振組合質(zhì)譜(LTQOrbitrap)鑒定出前纖維

4、蛋白-1(Profilin-1)的唯一片段4個(gè),覆蓋率93％,可信度為100%;半胱氨酸蛋白酶抑制劑 C(Cystatin C)的唯一性片段6個(gè),覆蓋率90%,可信度為100%。(3)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),Profilin-1含140個(gè)氨基酸,分子量為15054Da,與SELDI檢測到的目標(biāo)蛋白質(zhì)分子量一致,質(zhì)譜鑒定到的4個(gè)唯一性片段與人Profilin-1完全匹配;Cystatin C含146個(gè)氨基酸,分子量為15779Da,與SELD

5、I檢測到的目標(biāo)蛋白分子量一致,質(zhì)譜鑒定到的6個(gè)唯一性片段與人Cystatin C完全匹配。
　　結(jié)論:(1)VSD患者與健康對照者外周血血清蛋白質(zhì)圖譜存在差異。(2)分子量為5419Da、5640Da、7779Da、15141 Da和15884Da的差異蛋白質(zhì)可能是與 VSD相關(guān)的特異性蛋白質(zhì)。(3)進(jìn)一步分離鑒定發(fā)現(xiàn), Profilin-1和 Cystatin C可能是室間隔缺損的血清標(biāo)志蛋白質(zhì)之一。(4) SELDI-TOF-