p130CAS對(duì)胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：檢測(cè)p130CAS基因在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)，明確上調(diào)或抑制p130CAS基因表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響，探討p130CAS對(duì)胃癌惡性生物學(xué)表型的影響及可能的分子機(jī)制，從而為闡明p130CAS在胃癌治療中的潛在價(jià)值提供理論依據(jù)。
　　方法：1、構(gòu)建包裝p130CAS慢病毒干擾載體、p130CAS慢病毒過(guò)表達(dá)載體及其對(duì)照載體，轉(zhuǎn)染AGS細(xì)胞株，篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株：AGS/p130CAS過(guò)表達(dá)、AGS/p130CAS阻斷，RT-

2、PCR及Western-Blot證實(shí)載體的有效性。2、蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)各個(gè)細(xì)胞株p130CAS磷酸化的水平。3、重組p130CAS慢病毒干擾載體、p130CAS慢病毒過(guò)表達(dá)載體及其對(duì)照載體感染AGS細(xì)胞后，采用MTT法測(cè)定各組細(xì)胞OD值，比較各組細(xì)胞增殖情況。4、重組p130CAS慢病毒干擾載體、p130CAS慢病毒過(guò)表達(dá)載體和相應(yīng)的對(duì)照載體感染AGS細(xì)胞后，運(yùn)用AnnexinV-PI流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，并進(jìn)行各組間比較。

3、　　結(jié)果：1、本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了重組慢病毒過(guò)表達(dá)載體及慢病毒干擾載體，構(gòu)建的慢病毒載體能夠有效感染胃癌細(xì)胞株AGS細(xì)胞，PCR、Western-blot檢測(cè)顯示感染過(guò)表達(dá)慢病毒載體后目的細(xì)胞p130CAS mRNA及蛋白的表達(dá)水平高于感染前，而感染慢病毒干擾載體后目的細(xì)胞p130CAS mRNA及蛋白的表達(dá)水平與感染前相比，顯著降低。2、p130CAS磷酸化存在各個(gè)胃癌細(xì)胞株中，分別與對(duì)照組相比發(fā)現(xiàn)，AGS/p130CAS阻斷的細(xì)胞株p1

4、30CAS磷酸化水平明顯下降，而AGS/p130CAS高表達(dá)細(xì)胞株p130CAS磷酸化水平增加。3、感染后72h收集各組細(xì)胞，MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞的OD值，感染重組慢病毒干擾載體后對(duì)AGS細(xì)胞的生長(zhǎng)有顯著抑制作用，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而感染慢病毒過(guò)表達(dá)載體后p130CAS對(duì)AGS細(xì)胞的生長(zhǎng)無(wú)明顯影響（P＞0.05）。4、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)感染前后細(xì)胞的凋亡率變化，感染重組慢病毒干擾載體后AGS細(xì)胞凋亡率明顯增加，顯著高于空病