2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分 TrKB及VEGF在鼻咽癌組織中的表達(dá)及臨床意義
   目的:
   鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)是來源于鼻咽上皮組織的高度惡性腫瘤,其預(yù)后與腫瘤的局部復(fù)發(fā)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)腫瘤血管形成與惡性腫瘤生長、侵襲轉(zhuǎn)移與及預(yù)后密切相關(guān)。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是人們發(fā)現(xiàn)的重要的血管生成

2、因子,通過促腫瘤血管生成而在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。酪氨酸激酶B(Tyrosine kinase B,TrKB)在腫瘤血管生成及腫瘤生長,浸潤轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。本部分研究意在探討VEGF及TrKB在NPC組織中的表達(dá)并比較兩者表達(dá)的相關(guān)性及分析與腫瘤臨床特征的關(guān)系。
   方法:
   采用免疫組化方法檢測55例鼻咽癌組織和30例正常鼻咽組織中VEGF及TrKB蛋白表達(dá)水平,比較二者表達(dá)差異。根據(jù)患者年齡、腫瘤臨床

3、分型、原發(fā)灶大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移將病例分組,應(yīng)用雙變量相關(guān)pearson檢驗(yàn)分析研究VEGF及TrKB表達(dá)與腫瘤臨床病理特征之間的關(guān)系
   結(jié)果:
   1.VEGF蛋白于腫瘤細(xì)胞漿及血管內(nèi)皮細(xì)胞漿中均表達(dá),TrKB蛋白陽性表達(dá)絕大多數(shù)位于細(xì)胞漿內(nèi)。在55例鼻咽癌中,45例表達(dá)TrKB陽性,表達(dá)率為82.1%,47例表達(dá)VEGF陽性,表達(dá)率為85.7%。30例正常鼻咽組織中,只有3例表達(dá)TrKB陽性,5例表達(dá)

4、VEGF陽性,腫瘤組織中TrKB、VEGF陽性表達(dá)率明顯高于正常鼻咽組織(P<0.05),鼻咽癌組織中VEGF與TrKB表達(dá)有明顯相關(guān)性(相關(guān)系數(shù)R=0.586,P<0.05)。
   2.VEGF蛋白表達(dá)與NPC的臨床分期(P=0.002)、腫瘤的直徑大小(P=0.009)及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.001)明顯相關(guān),與患者性別、年齡、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)。TrKB蛋白表達(dá)與臨床分期(P=0.00)、腫瘤的直徑大小(

5、P=0.00)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.006)明顯相關(guān),與患者性別、年齡、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)。
   結(jié)論:
   1.VEGF,TrKB在NPC組織中表達(dá)增加,可能與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān);
   2.TrKB可能與鼻咽癌血管形成有關(guān)。
   第二部分阻斷BDNF-TrKB通路對鼻咽癌細(xì)胞腫瘤生物學(xué)行為影響的體外研究
   目的:
   探討通過酪氨酸激酶受體抑制劑K252

6、a抑制TrKB表達(dá),觀察抑制TrKB表達(dá)對體外培養(yǎng)的鼻咽癌CNE-1細(xì)胞增殖、運(yùn)動遷移、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及對VEGF表達(dá)的影響。
   方法:
   分別用不同濃度K252a干預(yù)鼻咽癌CNE-1細(xì)胞,MTT實(shí)驗(yàn)比較不同濃度K252a對鼻咽癌CNE-1細(xì)胞生長的影響,并計算細(xì)胞生存(增殖)率,篩選出K252a最佳干預(yù)濃度;通過劃痕愈合試驗(yàn)觀察抑制TrKB表達(dá)后對鼻咽癌CNE-1細(xì)胞運(yùn)動遷移能力的影響;流式細(xì)胞術(shù)分析抑制T

7、rKB表達(dá)對鼻咽癌CNE-1細(xì)胞遷移、細(xì)胞周期和凋亡的影響。
   分別用RT-PCR、Western-blot檢測K252a干預(yù)鼻咽癌CNE-1細(xì)胞后VEGF、TrkB在mRNA以及蛋白層面表達(dá)的改變并與對照組比較差異。
   結(jié)果:
   MTT實(shí)驗(yàn):K252a能明顯抑制鼻咽癌CNE-1細(xì)胞的增殖,使細(xì)胞數(shù)量減少、密度減低、細(xì)胞生存率下降,其對鼻咽癌CNE-1細(xì)胞生長的抑制作用與K252a干預(yù)時間、濃度呈正相

8、關(guān)。K252a作用48h使鼻咽癌CNE-1細(xì)胞增殖率抑制最明顯的濃度為400 nmol/L,細(xì)胞生存減少50%(與對照組相比),故選取此濃度為K252a最佳干預(yù)濃度。
   劃痕愈合實(shí)驗(yàn):抑制TrKB表達(dá)可使劃痕愈合延遲,使12h鼻咽癌CNE-1細(xì)胞遷移距離明顯小于對照組,但無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.18),使24h小時細(xì)胞遷移距離細(xì)胞遷移距離明顯少于對照組(P=0.013),說明抑制TrKB表達(dá)能一定程度上抑制鼻咽癌CNE-1

9、細(xì)胞的運(yùn)動遷移能力。
   流式細(xì)胞儀分析:K252a干預(yù)鼻咽癌CNE-1細(xì)胞的細(xì)胞周期分布,與對照組相比,鼻咽癌CNE-1細(xì)胞中處于G0/G1期的細(xì)胞顯著增多(57.67±7.03 vs73.86±4.22,P=0.018),而處于S期(30.67±3.68 vs15.37±2.16,P=0.025)的細(xì)胞顯著減少,比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測K252a干預(yù)鼻咽癌CNE-1細(xì)胞后細(xì)胞凋亡情況,K252a

10、與對照組細(xì)胞的凋亡率比較有統(tǒng)計學(xué)意義(22.27±3.09 vs3.42±2.56,P=0.01)。
   Western blot:K252a干預(yù)鼻咽癌CNE-1細(xì)胞后,與對照組相比,VEGF蛋白表達(dá)水平下調(diào)(0.6883±0.19 vs0.378±0.44),TrKB蛋白表達(dá)水平下調(diào)(0.631±0.15 vs0.313±0.28),差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
   RT-PCR:K252a干預(yù)鼻咽癌CNE

11、-1細(xì)胞后,與對照組相比,細(xì)胞內(nèi)TrkB mRNA表達(dá)下調(diào)(0.67±0.37 vs0.435±0.63);VEGF mRNA表達(dá)下調(diào)(0.6883±0.49 vs0.425±0.17),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
   結(jié)論
   1.TrKB表達(dá)抑制可降低鼻咽癌CNE-1細(xì)胞生長遷移能力;
   2.TrKB表達(dá)抑制可通過促進(jìn)鼻咽癌CNE-1細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期改變和降低VEGF表達(dá),從而減弱生長與遷移

12、能力;
   3.TrKB通過調(diào)控VEGF影響鼻咽癌血管形成。
   第三部分 TrKB調(diào)控鼻咽癌新生血管生成的體內(nèi)研究
   目的:
   體內(nèi)腫瘤生長依賴腫瘤血管生成。近年來發(fā)現(xiàn)VEGF通過誘導(dǎo)血管生成及促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂從而促進(jìn)血管形成。研究證實(shí)血管生成、微血管與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系密切,微血管密度(microvesseldensity,MVD)與腫瘤的轉(zhuǎn)移和預(yù)后有關(guān),且VEGF表達(dá)與MVD的表

13、達(dá)有良好的相關(guān)性。前部分體外實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)K252a能抑制VEGF蛋白和基因水平的表達(dá),本部分實(shí)驗(yàn)通過建立裸小鼠移植瘤模型,探討K252a干預(yù)鼻咽癌CNE-1細(xì)胞對人鼻咽癌血管生成抑制作用的體內(nèi)研究,為針對鼻咽癌抗血管生成基因治療尋找新的思路。
   方法:
   使用4-6周齡雄性BALB/C-nu/nu裸鼠,體重在16~20g,將人鼻咽癌CNE-1細(xì)胞于裸鼠右側(cè)季肋部皮下注射,建立荷人鼻咽癌細(xì)胞裸小鼠皮下移植瘤模型

14、。隨機(jī)將實(shí)驗(yàn)動物分為2組,A組:K252a干預(yù)組,7只;B組:PBS組,7只;于接種腫瘤細(xì)胞后第6、8、10、12、14天用微量注射器于A組裸鼠腫瘤內(nèi)多點(diǎn)注射K252a藥物,400nmol/L200ul/次,對兩組移植瘤模型進(jìn)行為期21天的實(shí)驗(yàn)觀察,自第一次注射藥物后每隔2天測量1次裸鼠腫瘤體積并繪制腫瘤生長曲線。
   于接種后第21天處死,剝離腫瘤標(biāo)本,測量最后體積,觀察標(biāo)本整體特征。取出部分組織的標(biāo)本于固定于10%福爾馬林

15、溶液中,于我院病理科常規(guī)石蠟包埋后行連續(xù)切片,進(jìn)行常規(guī)HE染色、VEGF、TrKB和CD31相關(guān)抗原免疫組化染色。
   結(jié)果:
   1.中瘤標(biāo)本大體形態(tài)及HE染色觀察:2組實(shí)驗(yàn)動物成瘤均于接種后第4天。兩組腫瘤與周圍組織分界清楚,包膜基本完整。K252a干預(yù)組治療組皮下腫瘤瘤體較小,呈不規(guī)則球形,也有的呈分葉狀,表面灰白色,質(zhì)地較硬。剖面呈白色,剖面滲血較少。對照組腫瘤瘤體較K252a組明顯增大,表面多不平,有分葉狀

16、結(jié)節(jié)狀,表面豐富血管形成,剖面滲血較多;
   2.實(shí)驗(yàn)動物瘤體體積觀察: K252a干預(yù)組從給藥開始,腫瘤生長緩慢,第21天腫瘤瘤體體積為(328+326.7) mm3,同期對照組為(1044+818) mm3;
   3.兩組CD31標(biāo)記的MVD計數(shù)與VEGF、TrKB染色評分對比及相關(guān)性分析
   K252a干預(yù)組和對照組陽性血管計數(shù)分別為22.39±4.72、49.79±11.12,方差分析各組間差別具有

17、顯著性(P<0.05)。K252a干預(yù)組VEGF表達(dá)明顯比對照組下降,并有統(tǒng)計學(xué)差異(7.57+2.82 vs9.86±2.79,P=0.007),K252a干預(yù)組明顯比對照組TrKB表達(dá)下降,并有統(tǒng)計學(xué)差異(5.8571±2.79 vs7.43±2.64,P=0.005),各組VEGF表達(dá)與MVD明顯相關(guān)(對照組:r=0.88,P=0.009,K252a組:r=0.96,P=0.01),MVD與TrKB表達(dá)明顯正相關(guān)(對照組:r=0.

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