慢性阻塞性病急性加重期的生物標(biāo)志物組群研究.pdf

1、第一部分慢性阻塞性肺病蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)文獻(xiàn)回顧
　　 目的：蛋白質(zhì)組學(xué)方法用于研究細(xì)胞、活檢組織、體液中的蛋白組分，廣泛用于深入探索人類疾病機(jī)制，尋找用于診斷、治療、預(yù)后的特異性的新型生物標(biāo)志物，以及研發(fā)藥物靶位等方面。本文第一部分研究意在通過(guò)回顧以往慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)的蛋白質(zhì)組學(xué)報(bào)道，從中總結(jié)已有的候選生物標(biāo)志物。
　　 方法：利用文獻(xiàn)檢

2、索，回顧以往基于蛋白質(zhì)組學(xué)方法的COPD報(bào)道。歸納總結(jié)這些報(bào)道涉及的研究對(duì)象、研究方法、候選生物標(biāo)志物等內(nèi)容。同時(shí)比較部分候選生物標(biāo)志物在其他慢性肺部疾病的變化。
　　 結(jié)果：通過(guò)文獻(xiàn)檢索，得到符合納入標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)共8篇。所涉及的研究對(duì)象，除COPD外，還包括正常非吸煙人群，健康吸煙者，α1胰蛋白酶缺陷者，支氣管哮喘，肺囊性纖維化，特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化，支氣管擴(kuò)張等。所選用的研究標(biāo)本來(lái)源于肺組織活檢標(biāo)本，支氣管肺泡灌洗液，痰液或血液

3、。使用的蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)手段包括雙向電泳，反向高效液相色譜，串聯(lián)質(zhì)譜法，基質(zhì)輔助激光解離質(zhì)譜法，表面增強(qiáng)激光解吸電離質(zhì)譜法等。在不同標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)的大量候選生物標(biāo)志物可歸屬于氧化-抗氧化系統(tǒng)，蛋白酶-抗蛋白酶系統(tǒng)，炎癥介質(zhì)以及肺部特異性蛋白等。
　　 結(jié)論：?jiǎn)我坏鞍纂y以作為生物標(biāo)志物，而由多個(gè)蛋白組成的生物標(biāo)志物組群則可更好的反映復(fù)雜疾病的狀態(tài)。蛋白質(zhì)組學(xué)在COPD研究中，特別是挖掘生物標(biāo)志物方面獨(dú)具優(yōu)勢(shì)，但仍需建立標(biāo)準(zhǔn)化體系，規(guī)范組

4、學(xué)研究，并最大限度的聯(lián)系臨床資料；利用生物信息學(xué)工具將臨床資料和蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果相聯(lián)系，以期建立數(shù)字化模式監(jiān)測(cè)COPD的進(jìn)程和預(yù)后。
　　 第二部分 COPD及急性加重期病例血漿炎性生物標(biāo)志物組群的定性研究
　　 目的：COPD不斷增長(zhǎng)的死亡率與癥狀急性加重(chronic obstructive pulmonarydisease in acute exacerbatioins，AECOPD)的頻率和嚴(yán)重程度有關(guān)。系統(tǒng)性炎

5、癥在COPD/AECOPD中發(fā)揮重要作用。在第一部分研究中發(fā)現(xiàn)，目前蛋白質(zhì)組學(xué)中存在的問(wèn)題之一是如何將組學(xué)的結(jié)果與臨床信息相結(jié)合。因而本文第二部分研究意在通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)方法檢測(cè)多種炎性介質(zhì)，并利用新方法將組學(xué)結(jié)果和臨床信息結(jié)合，以期從新角度發(fā)現(xiàn)候選生物標(biāo)志物組群。
　　 方法：收集健康正常人、COPD以及AECOPD患者的血液標(biāo)本，利用抗體芯片，定性檢測(cè)507個(gè)血漿炎癥因子。設(shè)計(jì)一套用于評(píng)價(jià)COPD及AECOPD病例病情的臨床評(píng)

6、分系統(tǒng)(DESS)，包括主要癥狀、體征、實(shí)驗(yàn)室檢查等臨床信息，用于評(píng)估患者疾病的嚴(yán)重程度。將芯片檢測(cè)的差異蛋白與DESS評(píng)分結(jié)合進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果：20個(gè)炎癥因子在3組人群間存在顯著差異(p<0.05)。其中Cerberus1，Growth Hormone R，IL-1F6，IL-17B R，IL-17D，IL-19，Lymphotoxinβ，MMP-10，Thrombopoietin和TLR4與患者DESS評(píng)分相關(guān)(

7、p<0.05)。在AECOPD患者中存在系統(tǒng)性炎癥的下調(diào)反應(yīng)。
　　 結(jié)論：20個(gè)炎癥因子可能組成檢測(cè)COPD/AECOPD的候選生物標(biāo)志物組群。將臨床信息量化并與組學(xué)結(jié)果結(jié)合的方法，為篩選疾病特異性和疾病階段特異性的生物標(biāo)志物提供了新的研究模式。
　　 第三部分 COPD及急性加重期病例血漿趨化因子組群動(dòng)態(tài)變化的研究
　　 目的：第三部分意在利用蛋白質(zhì)組學(xué)方法定量檢測(cè)COPD/AECOPD循環(huán)中趨化因子的動(dòng)態(tài)變

8、化。并繼續(xù)使用第二部分中的評(píng)分系統(tǒng)，對(duì)AECOPD患者進(jìn)行動(dòng)態(tài)評(píng)分，以期發(fā)現(xiàn)與AECOPD病程進(jìn)展相關(guān)的候選生物標(biāo)志物組群。
　　 方法：收集健康正常人、COPD以及AECOPD患者的血液標(biāo)本。AECOPD患者分別在確診時(shí)、治療中及癥狀好轉(zhuǎn)后采集血液標(biāo)本。利用多重趨化因子抗體芯片，定量檢測(cè)血漿中40個(gè)趨化因子。將芯片檢測(cè)的差異蛋白與DESS評(píng)分結(jié)合進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果：在40個(gè)趨化因子中，30個(gè)在COPD和健康正

9、常人間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)，16個(gè)在AECOPD和健康正常人間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。13個(gè)趨化因子，包括BTC，IL-9，IL-18Bpa，CCL22，CCL23，CCL25，CCL28，CTACK，LIGHT，MSPa，MCP-3，MCP-4和OPN，在三組間均存在差異。部分趨化因子的表達(dá)量與DESS評(píng)分間存在關(guān)聯(lián)(p<0.05)。
　　 結(jié)論：13個(gè)趨化因子可能組成監(jiān)測(cè)AECOPD發(fā)生和治療進(jìn)展的候選生物