睪酮通過細(xì)胞膜雄激素受體影響骨髓巨噬細(xì)胞中Notch受體及配體的表達(dá).pdf

1、研究目的:基于雄激素對巨噬細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)作用和Notch受體對細(xì)胞發(fā)育分化過程的影響,研究二者之間的關(guān)系就顯得尤為重要,然而,目前尚未見相關(guān)的報道.本研究擬從RNA水平和蛋白質(zhì)水平探討睪酮對骨髓巨噬細(xì)胞中Notch基因家族表達(dá)的影響,并對雄激素信號在巨噬細(xì)胞中的轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)行初步分析.研究方法:L929條件培養(yǎng)基(LCM)富含巨噬細(xì)胞集落刺激因子(macrophagecloning stimulatory factor,M-CSF),可以誘導(dǎo)

2、小鼠骨髓細(xì)胞分化形成巨噬細(xì)胞.原代培養(yǎng)骨髓細(xì)胞5天后,利用熒光標(biāo)記的抗F4/80抗體,通過流式細(xì)胞儀對培養(yǎng)體系中巨噬細(xì)胞的純度進(jìn)行分析,同時分選出F4/80抗原呈陽性表達(dá)的細(xì)胞,此即為骨髓來源的巨噬細(xì)胞(bone marrow-derived macrophages,BMMs).首先把巨噬細(xì)胞分成兩組,一組用5 μ g/ml的LPS處理,另一組不做處理.其次,用不同濃度的睪酮(0nM,10nM,20nM,50nM,100nM)與上述巨噬

3、細(xì)胞共同培養(yǎng)24小時.分別提取巨噬細(xì)胞的總RNA和總蛋白質(zhì),利用RT-PCR和western blotting等方法分析巨噬細(xì)胞中Notch1、Notch2和Jagged1基因的表達(dá).為探討雄激素在巨噬細(xì)胞中的作用機(jī)制,采用RT-PCR、western blotting和激光共聚焦顯微鏡等方法檢測巨噬細(xì)胞中是否有雄激素受體的表達(dá);同時觀察不能自由透過細(xì)胞膜的testosterone-BSA(T-BSA)分子在巨噬細(xì)胞膜表面的結(jié)合狀況.最