睪酮通過細胞膜雄激素受體影響骨髓巨噬細胞中Notch受體及配體的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、研究目的:基于雄激素對巨噬細胞功能的調節(jié)作用和Notch受體對細胞發(fā)育分化過程的影響,研究二者之間的關系就顯得尤為重要,然而,目前尚未見相關的報道.本研究擬從RNA水平和蛋白質水平探討睪酮對骨髓巨噬細胞中Notch基因家族表達的影響,并對雄激素信號在巨噬細胞中的轉導進行初步分析.研究方法:L929條件培養(yǎng)基(LCM)富含巨噬細胞集落刺激因子(macrophagecloning stimulatory factor,M-CSF),可以誘導

2、小鼠骨髓細胞分化形成巨噬細胞.原代培養(yǎng)骨髓細胞5天后,利用熒光標記的抗F4/80抗體,通過流式細胞儀對培養(yǎng)體系中巨噬細胞的純度進行分析,同時分選出F4/80抗原呈陽性表達的細胞,此即為骨髓來源的巨噬細胞(bone marrow-derived macrophages,BMMs).首先把巨噬細胞分成兩組,一組用5 μ g/ml的LPS處理,另一組不做處理.其次,用不同濃度的睪酮(0nM,10nM,20nM,50nM,100nM)與上述巨噬

3、細胞共同培養(yǎng)24小時.分別提取巨噬細胞的總RNA和總蛋白質,利用RT-PCR和western blotting等方法分析巨噬細胞中Notch1、Notch2和Jagged1基因的表達.為探討雄激素在巨噬細胞中的作用機制,采用RT-PCR、western blotting和激光共聚焦顯微鏡等方法檢測巨噬細胞中是否有雄激素受體的表達;同時觀察不能自由透過細胞膜的testosterone-BSA(T-BSA)分子在巨噬細胞膜表面的結合狀況.最

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