2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、背景:癌癥是威脅人類健康的第一殺手,而化療是癌癥治療的重要手段,在臨床治療中由于多藥耐藥(Multidrug resistance,MDR)的出現(xiàn),造成化療的失敗。因此,探究藥物產(chǎn)生耐藥性的原因和尋找有效的克服耐藥的藥物顯得尤為重要。眾所周知,人類多種常見癌癥中均有EGFR高表達(dá),其中包括我國高發(fā)的肝癌,近年來分子靶向藥物EGFR-TKI開始試用于治療晚期肝癌,個別藥物取得了突破性進(jìn)展,但是其潛在的耐藥問題值得我們關(guān)注;最近有研究顯示N

2、O能克服經(jīng)典ABC轉(zhuǎn)運蛋白介導(dǎo)的耐藥?;谝陨蟽蓚€方面,本研究旨在研究靶向EGFR的TKI艾洛替尼、吉非替尼和凡德他尼在肝癌HepG2細(xì)胞中潛在的耐藥機制,并對NO供體型化合物AB-19在克服耐藥腫瘤的活性和機制進(jìn)行評價研究。
   1.替尼類藥物耐藥機制
   目的:體外建立人肝癌艾洛替尼、吉非替尼和凡德他尼耐藥的細(xì)胞株HepG2/Erlotinib、HepG2/Gefitinib和HepG2/Vandatinib,鑒

3、定其生物學(xué)特性,并對其耐藥機制進(jìn)行初步探討。
   方法:以逐步遞增聯(lián)合大劑量藥物沖擊方法,在體外連續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞HepG2,建立替尼類藥物耐藥的細(xì)胞株HepG2/Erlotinib、HepG2/Gefitinib和HepG2/Vandatinib。以SRB法測定其耐藥倍數(shù)和耐藥譜,測定細(xì)胞生長曲線并計算細(xì)胞群體倍增時間,流式細(xì)胞術(shù)檢測其細(xì)胞周期,以RT-PCR和Westernblot方法檢測耐藥細(xì)胞中耐藥基因bcrp基因

4、及其蛋白BCRP的表達(dá),用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面BCRP蛋白表達(dá),并用基因芯片和雙向電泳對耐藥細(xì)胞HepG2/Gefitinib和敏感細(xì)胞HepG2進(jìn)行鑒定,對其耐藥機制進(jìn)行研究。
   結(jié)果:成功建立了人肝癌細(xì)胞靶向藥物EGFR-TKI的耐藥細(xì)胞株HepG2/Erlotimb、HepG2/Gefitinib和HepG2/Vandatinib,它們產(chǎn)生了原藥4-10倍的低倍耐藥,其對順鉑、紫杉醇、阿霉素、米托葸醌和拓泊替康有交叉

5、耐藥性,而HepG2/Erlotinib對紫杉醇保持敏感;耐藥細(xì)胞倍增時間變長,流式細(xì)胞分析表明耐藥細(xì)胞比敏感細(xì)胞S期和G2/M期比例增高,G0/G1期比例減少,經(jīng)過RT-PCR,Western blot和流式細(xì)胞術(shù)檢測,耐藥細(xì)胞中bcrp基因和BCRP蛋白表達(dá)升高,對耐藥細(xì)胞HepG2/Gefitinib和敏感細(xì)胞HepG2的基因芯片和雙向電泳結(jié)果顯示耐藥細(xì)胞耐藥性的產(chǎn)生可能與上調(diào)的基因或蛋白有關(guān),深入的機制研究還在進(jìn)行中。
 

6、  結(jié)論:建立的人替尼類藥物耐藥的細(xì)胞株HepG2/Erlotinib、HepG2/Gefitinib和HepG2/Vandatinib具有耐藥細(xì)胞的特征和生物學(xué)特性,其耐藥機制與細(xì)胞中BCRP蛋白的上調(diào)有關(guān),也可能與鑒定出來差異基因或蛋白相關(guān)。
   2.NO供體型化合物克服腫瘤耐藥研究
   目的:研究NO供體型化合物AB-19對經(jīng)典耐藥相關(guān)蛋白介導(dǎo)的耐藥和相應(yīng)敏感細(xì)胞的細(xì)胞毒性,以及克服腫瘤耐藥的機制。
 

7、  方法:采用MTS和SRB法測定對耐藥及敏感細(xì)胞(HEK93/BCRP、HEK293/MRP1和HEK293/vector,K562/A02和K562)以及肝癌細(xì)胞與正常肝細(xì)胞的(HepG2和L02)的細(xì)胞毒性;應(yīng)用NO檢測試劑盒測定NO釋放與活性的關(guān)系,并考察加入NO清除劑(Hemoglobin)后對抗腫瘤活性的影響;采用FACS檢測AB-19對P-gp,BCRP逆轉(zhuǎn)功能影響;Western blot檢測AB-19對P-gp,BC

8、RP及相關(guān)信號通路進(jìn)行檢測。
   結(jié)論:NO供體型化合物AB-19對耐藥和敏感細(xì)胞具有較強的、相似的細(xì)胞毒作用,對肝癌細(xì)胞毒性大于正常肝細(xì)胞;對MDR-ABC耐藥相關(guān)蛋白BCRP,P-gp沒有逆轉(zhuǎn)、降解和增敏作用;機制研究表明,AB-19通過釋放高濃度NO來殺傷敏感/耐藥細(xì)胞,且對信號通路分子AKT、ERK、NF-κB無作用,而對p-AKT、P-ERK、p-NF-κB和HIF-1α有顯著作用,并呈時間和劑量依賴性,為克服耐藥腫

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