一種新型免疫磁珠富集技術(shù)和肺癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測.pdf

1、目的:建立一種新型的特異性和敏感性較高的檢測肺癌患者外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circula tingtumor cells,CTCs)的方法,以利于發(fā)現(xiàn)早期肺癌隱形微轉(zhuǎn)移、評估肺癌的預(yù)后、檢測肺癌術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移、選擇治療以及判斷療效。
　　方法:(1)將不同數(shù)量(50～1000個)的肺癌細(xì)胞株(A549)混入2ml健康成人血標(biāo)本中以模擬腫瘤患者的血樣,對該血樣進(jìn)行紅細(xì)胞裂解和離心,沉淀所得細(xì)胞與經(jīng)過免疫磁珠標(biāo)記的上皮細(xì)胞粘附分子

2、(epithelialcelladhesionmolecule,EpCAM)抗體發(fā)生反應(yīng),然后經(jīng)一套自制的檢測裝置(由輸液泵、水平搖床、富集容器以及真空泵四個部分組成)對細(xì)胞進(jìn)行富集和分離,與磁標(biāo)記的EpCAM抗體反應(yīng)后的上皮細(xì)胞因?yàn)榇帕Φ淖饔帽患性谝粡埐Ｆ?最后用經(jīng)典的HE染色鑒定循環(huán)腫瘤細(xì)胞并計(jì)數(shù)。(2)計(jì)算摻入細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的腫瘤細(xì)胞回收率以驗(yàn)證該方法的穩(wěn)定性和敏感性,同時檢測20例健康志愿者血標(biāo)本驗(yàn)證該方法的特異性。(3)用上述方

3、法檢測42例肺癌患者外周血中的CTCs。
　　結(jié)果:在健康志愿者2ml外周血中分別摻入不同數(shù)目A549細(xì)胞株的條件下,腫瘤細(xì)胞的回收率在68％～82%之間,摻入細(xì)胞間回歸方程為y=0.6419x+8.8875,相關(guān)系數(shù)為0.9958。血標(biāo)本中摻入腫瘤細(xì)胞數(shù)量越多,檢出腫瘤細(xì)胞數(shù)也越多,含不同數(shù)量腫瘤細(xì)胞的各樣本組回收率之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。42例肺癌患者中有18(42.9%)例為CTCs陽性,隨著腫瘤的增大或轉(zhuǎn)