基于免疫磁珠和分子印跡技術(shù)建立農(nóng)藥西維因檢測(cè)方法的研究.pdf

1、西維因?qū)儆诎被姿狨ヮ愞r(nóng)藥，主要用于稻谷、小麥、高粱、玉米、花生、蔬菜、果樹等害蟲的預(yù)防及治理。西維因?qū)儆谥小⒌投拘赞r(nóng)藥，其防治機(jī)理是通過抑制害蟲體內(nèi)乙酰膽堿酯酶的活性，使乙酰膽堿在蟲體組織中蓄積，干擾蟲體的正常分泌系統(tǒng)。農(nóng)產(chǎn)品中西維因殘留對(duì)人體亦有同樣作用，常導(dǎo)致急性毒性、免疫毒性、生殖毒性等危害，因此對(duì)其檢測(cè)具有十分重要的意義。
　　農(nóng)藥殘留是現(xiàn)階段食品安全重點(diǎn)檢測(cè)項(xiàng)目之一。農(nóng)藥殘留最主要的檢測(cè)方法是儀器檢測(cè)法。儀器檢測(cè)法具有

2、靈敏度高、重現(xiàn)性好、適用范圍廣、可同時(shí)進(jìn)行多殘留分析等優(yōu)點(diǎn)，但儀器檢測(cè)法需要復(fù)雜的樣品前處理過程，檢測(cè)條件要求較高，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)且需要專業(yè)人員操作。食品流通從市場(chǎng)到消費(fèi)者速度快，范圍廣，儀器檢測(cè)難以實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)的目的。加強(qiáng)對(duì)農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)新方法的研究，研制方便、快捷、易操作的檢測(cè)方法勢(shì)在必行。
　　因此，本論文以免疫磁珠和分子印跡技術(shù)為基礎(chǔ)，建立三種快速檢測(cè)農(nóng)藥西維因的方法。主要結(jié)論如下：
　　(1)將人工合成的西維因半抗

3、原與牛血清白蛋白偶聯(lián)形成完全抗原，采取背部皮下多點(diǎn)注射法免疫新西蘭大耳白兔得到西維因多克隆抗體。同時(shí)采用一步水熱法制備具有氨基功能團(tuán)的Fe3O4磁納米粒子。以戊二醛為交聯(lián)劑偶聯(lián)氨基化Fe3O4磁納米粒子和西維因多克隆抗體，作為捕捉器；以辣根過氧化物酶標(biāo)記的西維因半抗原作為信號(hào)放大器，采用直接法通過測(cè)定吸光值實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)西維因含量。在最佳條件下，西維因濃度在1×10?3-10 mg L-1范圍內(nèi)具有較好的線性關(guān)系，抑制率最高可達(dá)90.6％

4、；測(cè)得的半抑制濃度(IC50)為0.077 mg L-1，檢出限(IC15)為1.48×10?3 mg L-1。以濃度1 mg L-1的西維因在相同條件下重復(fù)檢測(cè)三次，測(cè)得的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.67%。通過一系列的分析，所建立的抗體包被免疫磁珠可以用于西維因的快速檢測(cè)。
　　(2)以紙片為載體，農(nóng)藥西維因?yàn)槟０宸肿?，甲基丙烯?MAA)為功能單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)為交聯(lián)劑，偶氮二異丁腈(AIBN)為引發(fā)劑，采用傳統(tǒng)

5、熱聚合法在硅烷化修飾的紙片表面聚合分子印跡層，利用形成的對(duì)模板分子具有特異性識(shí)別能力的分子印跡位點(diǎn)作為西維因的仿生抗體，建立仿生酶聯(lián)免疫法，實(shí)現(xiàn)定性及定量檢測(cè)西維因含量。在最佳條件下，測(cè)得西維因濃度在1×10?3-1 mg L-1范圍內(nèi)具有較好的線性關(guān)系，抑制率最高可達(dá)69.8%，測(cè)得的半抑制濃度(IC50)為0.116 mg L-1，檢出限(IC15)為2.1×10?3 mg L-1。以濃度1 mg L-1的西維因在相同條件下重復(fù)檢測(cè)

6、三次，測(cè)得的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.69%。通過一系列的分析，所建立的以紙片為載體的分子印跡仿生酶聯(lián)免疫法可以用于西維因的快速檢測(cè)。
　　(3)以功能化離子液體1-乙烯基-3-己基咪唑六氟磷酸鹽為輔助媒介，通過靜電作用修飾量子點(diǎn)使其有效參與分子印跡聚合物的制備。以農(nóng)藥西維因?yàn)槟０宸肿?，MAA為功能單體，EGDMA為交聯(lián)劑，AIBN為引發(fā)劑，采用傳統(tǒng)熱聚合方法制備西維因量子點(diǎn)-分子印跡熒光傳感材料。通過吸附西維因造成量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度變化實(shí)現(xiàn)

7、定量檢測(cè)西維因含量。在最佳條件下，測(cè)得西維因濃度在4.97×10?7-3.98×10?4 moL L-1范圍內(nèi)熒光強(qiáng)度變化呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，測(cè)得的檢出限為1.47×10?7 moL L-1。以濃度10 mg L-1的西維因在相同條件下重復(fù)檢測(cè)五次，測(cè)得的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.5%。同時(shí)還對(duì)其再生重復(fù)使用性進(jìn)行了研究。在相同條件下重復(fù)檢測(cè)三次，測(cè)得的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.8%。通過一系列的分析，所建立的量子點(diǎn)-分子印跡熒光傳感材料可以用于西維因