人膠質(zhì)瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染p16基因后生物學(xué)特性的觀察.pdf

1、蘇州大學(xué)博士學(xué)位論文人膠質(zhì)瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染p16基因后生物學(xué)特性的觀察姓名：高宜錄申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：杜子威;劉道坤2001.4.1人腔質(zhì)瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染p 1 6 基因后生物學(xué)特性的觀察—— ! j ! ! 墮生長抑制和誘導(dǎo)分化作用，它是否對膠質(zhì)瘤細(xì)胞也有促分化作用尚無相關(guān)報(bào)道。抑癌基因替代療法在實(shí)驗(yàn)研究上取得了明顯效果，但放療和化療作為腫瘤輔助治療也有著不可替代的作用。目前對p 1 6 基因有放射增敏作用看法一致，而對膠質(zhì)瘤

2、細(xì)胞轉(zhuǎn)染p 1 6 基因后與化療藥物敏感性的關(guān)系尚無定論。／”本研究將p 1 6 基因轉(zhuǎn)染p 1 6 功能缺失的人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系S H G 一4 4 ，探討：( 1 ) 外源性p 1 6 基因?qū) 1 6 功能缺失的膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的影響。( 2 ) 膠質(zhì)瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染p 1 6 基因后相關(guān)癌基因和抑癌基因表達(dá)變化。( 3 ) D e x 對膠質(zhì)瘤細(xì)胞有無誘導(dǎo)分化作用，恢復(fù)p 1 6 基因功能，對誘導(dǎo)分化劑的作用有無影響。( 4 ) 膠質(zhì)瘤細(xì)胞

3、轉(zhuǎn)染p 1 6 基因后對常用化療藥物敏感性的變化。f 第一部分人膠質(zhì)瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染p 1 6 基因后細(xì)胞增殖及相關(guān)基因表達(dá)變化為探討外源性p 1 6 基因?qū) 1 6 基因缺失的膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的影響及轉(zhuǎn)染p 1 6 基因后相關(guān)癌基因、抑癌基因表達(dá)的變化。用R T —P C R 和免疫組化法證實(shí)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系S H G 一4 4 有p 1 6 基因功能缺失。應(yīng)用分子克隆技術(shù)將人p 1 6c D N A 克隆入哺乳動(dòng)物基因表達(dá)載體p c D N

4、 A 3 的B a m HI 和X h oI 位點(diǎn)之間，構(gòu)建p 1 6 基因表達(dá)載體p c D N A 3 一P 1 6 。脂質(zhì)體介導(dǎo)法將其轉(zhuǎn)染到S H G 一4 4 。經(jīng)G 4 1 8 篩選得到表達(dá)p 1 6 蛋白的陽性克隆S H G 一4 4 一p 1 6 細(xì)胞。陽性克隆經(jīng)P C R 證實(shí)p 1 6c D N A 已轉(zhuǎn)入S H G 一4 4細(xì)胞，W e s t e r nb l o t 和免疫組化顯示有p 1 6 蛋白表達(dá)。細(xì)胞生長

5、曲線顯示S H G 一4 4 - p 1 6 生長明顯受到抑制，其抑制率達(dá)8 4 ．2 7 ％。在軟瓊脂上克隆形成能力下降約6 倍。細(xì)胞周期分析表明處在G ．期細(xì)胞由3 5 ．5 3 ％提高到6 1 ．3 5 ％。S H G - 4 4 - p 1 6 在裸鼠體內(nèi)致瘤能力有所下降。R T —P C R 半定量分析S H G 一4 4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染p 1 6 基因前后的R b 、C D K 4 、p 5 3和P T E N 基因表達(dá)量的變化，