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文檔簡介
1、目的:將培養(yǎng)的人神經干細胞(neuralstemcells，NSC)移植至新生鼠缺血缺氧性腦損傷(HIBI)的海馬區(qū)，觀察植入細胞的遷移及分化。探索缺血缺氧性腦病(HIE)的治療方法。 材料與方法:1.細胞培養(yǎng)：取孕12周人胚胎腦組織，制備成單細胞懸液，接種于N2培養(yǎng)基中(D/F12+N2+B27)，細胞接種濃度為3～5×105/ml，培養(yǎng)基中添加表皮生長因子(EGF)20ng/ml、堿性成纖維細胞生長因子(basicfibro
2、blastgrowthfactorbFGF)10ng/ml、白血病抑制因子(LIF)10ng/ml,培養(yǎng)十天后，添加10％胎牛血清(fetalbovineserumFBS)誘導分化4-5天，形成含5-30個細胞的小神經細胞球。細胞球經低速離心濃縮，在N2培養(yǎng)基中調整細胞終濃度為5.0×104cells/ul，待移植時用?！ ?.神經干細胞移植：SD新生大鼠(n=32)生后第7天進行HIBD模型制作，模型制作后3天予人NSC移植。準備移
3、植的幼鼠麻醉后固定在立體定向儀上，人NSC注入左側(損傷側)海馬區(qū)，注射位點如下：AP=-3mm，ML=-2.5mm，DV=-2mm。通過微量注射器注射2ul(細胞濃度為5.0×104cells/ul)。移植后動物不予免疫抑制劑。移植后1周、2周、4周及3月的鼠過量麻醉后，4％的多聚甲醛心臟灌注，取腦，石蠟包埋，冠狀切片(5um)，用鼠抗－人細胞核蛋白(humannuclearprotein，hNuc)，兔抗－人神經絲蛋白(neurof
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