腺病毒介導(dǎo)的shRNA抑制cFLIP高表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞TRAIL耐藥影響的研究.pdf

1、目的:應(yīng)用含cFLIPshRNA元件的腺病毒感染對(duì)TRAIL耐藥的結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620,研究抑制cFLIP表達(dá)對(duì)該細(xì)胞耐藥的逆轉(zhuǎn)及細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法:
　　 1.將結(jié)腸癌細(xì)胞系SW620進(jìn)行復(fù)蘇、傳代培養(yǎng)。
　　 2.應(yīng)用已構(gòu)建好的hU6啟動(dòng)子調(diào)控的cFLIPshRNA元件的腺病毒,感染SW620細(xì)胞,選用無意義序列病毒進(jìn)行對(duì)照。
　　 3.應(yīng)用a)RT-PCR和Westernblot檢測(cè)細(xì)胞

2、中cFLIPmRNA水平及蛋白水平表達(dá)量的變化;b)流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)病毒感染前后結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡情況。
　　 結(jié)果:cFLIPmRNA表達(dá)水平目的基因組(0.12±0.02)明顯低于無意義序列轉(zhuǎn)染組(即陰性對(duì)照組,0.38±0.01)和空白對(duì)照組(0.41±0.03),差異具有顯著性(P＜0.05);cFLIPL蛋白表達(dá)水平目的基因組(0.75±0.12)明顯低于無意義序列轉(zhuǎn)染組(即陰性對(duì)照組,1.09±0.06)和空白對(duì)照組(1

3、.12±0.10),差異具有顯著性(P＜0.05);感染+TRAIL組細(xì)胞凋亡率(34.16±2.43%)明顯高于未感染組細(xì)胞(5.07±1.16%)、未感染+TRAIL組細(xì)胞(12.84±2.33%)及感染組細(xì)胞(6.51±1.56%),差異具有顯著性(P＜0.05),表明抑制細(xì)胞內(nèi)cFLIP高表達(dá)后其對(duì)TRAIL敏感性升高(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:結(jié)直腸癌細(xì)胞TRAIL耐藥與細(xì)胞內(nèi)cFLIP高表達(dá)有關(guān),抑制cFLIP高