血清抗C1q抗體在狼瘡腎炎中的臨床意義及其致病機(jī)制研究.pdf

1、研究背景：
　　 系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus,SLE)是一種累及多系統(tǒng)、多器官的自身免疫性疾病,多種自身抗體的產(chǎn)生及補(bǔ)體系統(tǒng)的變化是其主要特征之一。近年的研究發(fā)現(xiàn),系統(tǒng)性紅斑狼瘡,尤其是狼瘡腎炎(Lupus nephritis,LN)患者中存在一種針對(duì)Clq膠原樣區(qū)(CLR)的IgG型自身抗體,其在狼瘡腎炎發(fā)病機(jī)制中的作用和臨床意義可能僅次于抗ds—DNA抗體,因而日益為人們所重視。

2、
　　 Clq是第一補(bǔ)體成分Cl的一個(gè)亞基,是補(bǔ)體經(jīng)典激活途徑的始動(dòng)因素。Clq同時(shí)也是一種具有多種功能的蛋白質(zhì),參與天然免疫和適應(yīng)性免疫。Clq缺陷小鼠(Clqa-/-)會(huì)產(chǎn)生抗核抗體和腎小球腎炎；而在系統(tǒng)性紅斑狼瘡的動(dòng)物模型MRL-lpr小鼠的血清中可檢測(cè)出抗Clq的自身抗體,并有抗Clq抗體在腎組織中沉積,提示抗Clq抗體參與了小鼠狼瘡樣病變。近年的研究還發(fā)現(xiàn),在SLE出現(xiàn)腎損傷前或腎疾病復(fù)發(fā)前,就能夠檢測(cè)到抗Clq抗體,

3、抗Clq抗體水平升高預(yù)示狼瘡患者腎臟受累或狼瘡腎炎復(fù)發(fā)。
　　 狼瘡腎炎是影響SLE預(yù)后的重要因素。在既往眾多的研究中,除腎活檢外,并無(wú)可靠的指標(biāo)評(píng)價(jià)腎預(yù)后。人們一直研究一些血清學(xué)指標(biāo)與狼瘡腎炎的關(guān)系,例如抗ds—DNA抗體、補(bǔ)體水平等,但評(píng)價(jià)不一?？笴lq抗體能否作為有效評(píng)價(jià)狼瘡腎炎腎臟病變和病情活動(dòng)性,以及判斷療效和預(yù)后的一個(gè)新的血清學(xué)指標(biāo),值得進(jìn)一步探討。
　　 抗Clq抗體參與了狼瘡腎炎的發(fā)病,但其具體的發(fā)病機(jī)制

4、未明。Clq是補(bǔ)體經(jīng)典激活途徑的始動(dòng)因素。當(dāng)Clq的球狀頭部與免疫復(fù)合物結(jié)合,激活Cl,啟動(dòng)各種細(xì)胞反應(yīng),包括吞噬作用。當(dāng)血清中存在抗Clq抗體,抗Clq抗體與Clq的膠原樣區(qū)結(jié)合,導(dǎo)致補(bǔ)體經(jīng)典途徑不能進(jìn)行,細(xì)胞凋亡和免疫復(fù)合物清除障礙,刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生更多的自身抗體,可能是導(dǎo)致狼瘡腎炎發(fā)病的機(jī)制之一。最新的研究發(fā)現(xiàn),抗Clq抗體識(shí)別結(jié)合狀態(tài)的Clq,尤其是與結(jié)合在早期凋亡細(xì)胞表面的Clq相結(jié)合,提示抗Clq抗體、Clq與狼瘡腎炎細(xì)胞凋

5、亡之間可能有直接的關(guān)聯(lián)。抗Clq抗體與細(xì)胞凋亡的相關(guān)性,以及在狼瘡腎炎發(fā)病機(jī)制的作用需要深入探討。
　　 因此,本文擬從以下兩個(gè)方面對(duì)Clq抗體在狼瘡腎炎中的臨床意義及致病作用機(jī)制作進(jìn)一步的研究:
　　 1.檢測(cè)狼瘡腎炎患者血清中的抗Clq抗體,探討血清抗Clq抗體水平與狼瘡腎炎病情活動(dòng)、腎臟病理改變的相關(guān)性,并追蹤觀察抗Clq抗體水平的變化與狼瘡腎炎療效和預(yù)后的關(guān)系,探討抗Clq抗體的臨床意義。
　　 2.檢測(cè)

6、狼瘡腎炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)的凋亡率以及腎臟組織中凋亡細(xì)胞和凋亡小體的沉積,研究抗Clq抗體與狼瘡腎炎細(xì)胞凋亡的相關(guān)性,探討抗Clq抗體在狼瘡腎炎發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 狼瘡腎炎患者抗Clq抗體的檢測(cè)及臨床意義
　　 研究目的:探討血清抗Clq抗體水平與狼瘡腎炎病情活動(dòng)、腎臟病理改變的相關(guān)性,并追蹤觀察抗Clq抗體水平的變化與狼瘡腎炎療效和預(yù)后的關(guān)系,研究抗Clq抗體的臨床意義。
　　 研究方法:

7、首先以臨床橫斷面研究的策略,分析血清抗Clq抗體水平與狼瘡腎炎病情活動(dòng)以及腎臟病理改變的相關(guān)性。對(duì)全部入組病例進(jìn)行隨訪,分別于治療1個(gè)月和3個(gè)月后再次抽取外周靜脈血檢測(cè)抗Clq抗體。再以血清抗Clq抗體水平的變化作為研究因素,運(yùn)用隊(duì)列研究的策略,分析其對(duì)狼瘡腎炎療效和預(yù)后的影響。以入組時(shí)間為隨訪起點(diǎn),以尿蛋白轉(zhuǎn)陰性作為第一隨訪終點(diǎn),以病情緩解作為第二隨訪終點(diǎn)。研究對(duì)象為2002年6月至2006年12月在廣州市第一人民醫(yī)院和中山大學(xué)附屬第

8、一醫(yī)院風(fēng)濕科治療,并有同期腎活檢資料的狼瘡腎炎患者,共73例。另有40例無(wú)腎損害的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者和40例健康體檢人員作為對(duì)照。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清抗Clq抗體。
　　 計(jì)量資料以x±s表示,兩組間均數(shù)差異采用t檢驗(yàn)比較,多組間均數(shù)差異采用方差分析比較。相關(guān)性分析運(yùn)用Pearson相關(guān)分析方法。血清抗Clq抗體水平及其變化對(duì)尿蛋白轉(zhuǎn)陰和病情緩解的影響,采用生存分析的方法。并運(yùn)用COX回歸進(jìn)行多因素分析,校正

9、其它因素可能造成的混雜偏倚。全部統(tǒng)計(jì)學(xué)運(yùn)算采用STATA7.0軟件。
　　 研究結(jié)果:
　　 73例狼瘡腎炎中58例(79.5％)抗Clq抗體陽(yáng)性,40例無(wú)腎損害的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中11例(27.5％)陽(yáng)性；狼瘡腎炎組血清抗Clq抗體水平(95.3±55.2 U/ml)高于非狼瘡腎炎組(26.0±11.7)(P<0.001)。血清抗Clq抗體水平與SLEDAI評(píng)分和尿蛋白含量呈正相關(guān)(r=0.792,P<0.001和r

10、=0.419,P<0.001)；與補(bǔ)體C3、C4水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.639,P<0.001和r=-0.519,P<0.001)。
　　 方差分析顯示,Ⅳ型LN的血清抗Clq抗體水平最高,與其他各病理類型間比較有顯著性差異(與Ⅱ型比較,P<0.001；與Ⅴ型比較,P=0.008)；其次是Ⅲ型,血清抗Clq抗體水平高于Ⅱ型(P=0.024)。血清抗Clq抗體水平與狼瘡腎炎腎臟活動(dòng)指數(shù)(AI)(r=0.555,P<0.001)和慢

11、性指數(shù)(CI)(r=0.390,P<0.001)呈正相關(guān)。具體主要與下列指標(biāo)有相關(guān)性:白細(xì)胞浸潤(rùn)(r=0.316,P=0.006),血管內(nèi)皮細(xì)胞增生(r=0.324,P=0.005),纖維素樣壞死(r=0.344,P=0.003),細(xì)胞性/纖維細(xì)胞性新月體形成(r=0.448,P<0.001)和纖維性新月體形成(r=0.499,P<0.001)。腎臟Clq沉積≥++的血清抗Clq抗體水平高于Clq沉積-/+患者(P<0.001)。

12、>　　 根據(jù)治療三個(gè)月后的血清抗Clq抗體水平變化分組。治療三個(gè)月后血清抗Clq抗體水平明顯下降者(組1,即血清抗Clq抗體水平下降≥50％或檢測(cè)陰性)有41例(56.2％):治療后血清抗Clq抗體水平?jīng)]有顯著下降者(組2,即血清抗Clq抗體水平下降<50％或升高)有32例(43.8％)。對(duì)所有患者進(jìn)行隨訪追蹤,每月進(jìn)行一次終點(diǎn)評(píng)估。以尿蛋白轉(zhuǎn)陰作為觀察的終點(diǎn),作Kaplan—Meier曲線和Log-rank檢驗(yàn),結(jié)果顯示,兩組尿蛋白

13、轉(zhuǎn)陰的中位數(shù)時(shí)間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=9.58,P=0.002),治療后血清抗Clq抗體水平下降<50％或升高者(組2)尿蛋白轉(zhuǎn)陰時(shí)間更遲。
　　 另一個(gè)隨訪的終點(diǎn)是狼瘡腎炎病情緩解。COX回歸多因素方法分析影響狼瘡腎炎病情緩解的因素。納入分析的因素包括:年齡、性別、病程、C3、C4、IgG、IgA、IgM、血沉、24小時(shí)尿蛋白、血尿、血肌酐、腎臟病理WHO分型、腎臟病理活動(dòng)性指數(shù)(AI)、腎臟病理慢性指數(shù)(CI)、抗dsDNA抗

14、體、治療前和治療1個(gè)月、治療3個(gè)月后的血清抗Clq抗體水平,以及環(huán)磷酰胺治療等。結(jié)果顯示,腎臟病理WHO分型、CI、治療3個(gè)月后的血清抗Clq抗體水平和環(huán)磷酰胺治療是影響狼瘡腎炎病情緩解的獨(dú)立因素。其中,較重的病理類型(WHOⅣ、Ⅴ型)、慢性指數(shù)高以及治療3個(gè)月后仍有高滴度的血清抗Clq抗體是影響狼瘡腎炎病情緩解的危險(xiǎn)因素,而環(huán)磷酰胺治療是促進(jìn)狼瘡腎炎病情緩解的有利因素。
　　 研究結(jié)論:狼瘡腎炎患者血清中存在抗Clq抗體?？笴

15、lq抗體與狼瘡性腎炎的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。血清抗Clq抗體不僅能夠反映狼瘡腎炎的活動(dòng)性,而且在一定程度上反映腎臟的病理改變,對(duì)評(píng)估腎損害情況、評(píng)價(jià)療效及判斷預(yù)后均有重要臨床意義。檢測(cè)血清抗Clq抗體,并在治療中密切觀察這一指標(biāo)的動(dòng)態(tài)變化,結(jié)合其他臨床表現(xiàn),將為判斷病情和制定狼瘡腎炎的治療策略提供更好的依據(jù)。
　　 抗Clq抗體與細(xì)胞凋亡的相關(guān)性及在狼瘡腎炎發(fā)病機(jī)制中的作用
　　 研究目的:探討血清抗Clq抗體與狼瘡腎炎細(xì)

16、胞凋亡的相關(guān)性,進(jìn)一步研究抗Clq抗體在狼瘡腎炎發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 研究方法:
　　 探討狼瘡腎炎細(xì)胞凋亡情況:(1)檢測(cè)狼瘡腎炎患者PBMCs凋亡率；(2)檢測(cè)腎臟組織中的凋亡細(xì)胞及凋亡小體的沉積情況。研究狼瘡腎炎患者血清抗Clq抗體與PBMCs凋亡率和腎臟組織中凋亡細(xì)胞、凋亡小體沉積的相關(guān)性。研究對(duì)象是活動(dòng)性狼瘡腎炎患者40例,其中26例狼瘡腎炎患者有同期腎活檢資料,另有5例病理改變?yōu)槲⑿〔∽兊姆抢钳從I炎患者的

17、腎臟病理標(biāo)本作為疾病對(duì)照,20例健康體檢人員的外周血作為正常對(duì)照。
　　 用Amlexin V/PI流式細(xì)胞分析法檢測(cè)患者外周血淋巴細(xì)胞凋亡率。用脫氧核糖核昔酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)dUTP切口末端標(biāo)記法(terminal deoxynucleotidyltransferase—mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)檢測(cè)腎臟組織中凋亡細(xì)胞及凋亡小體。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清抗Clq抗

18、體。
　　 計(jì)量資料以x±s表示,兩組間均數(shù)差異采用t檢驗(yàn)比較。率問(wèn)的比較采用X2檢驗(yàn)。全部統(tǒng)計(jì)學(xué)運(yùn)算采用STATA7.0軟件。
　　 研究結(jié)果:
　　 活動(dòng)期狼瘡腎炎患者PBMCs早期凋亡率及總凋亡率均顯著高于正常對(duì)照組(P<0.001)。抗Clq抗體陽(yáng)性組與抗Clq抗體陰性組比較,PBMCs早期凋亡率顯著增加(P=0.001),總凋亡率亦顯著增加(P=0.003)。兩組患者的PBMCs早期凋亡率和總凋亡率均高

19、于正常對(duì)照組(P<0.001)。
　　 42.3％(11/26)狼瘡腎炎患者腎小球中的凋亡細(xì)胞及凋亡小體的沉積增加。腎小球有明顯凋亡細(xì)胞及凋亡小體沉積患者的血清抗Clq抗體水平高于沉積不明顯的患者(P<0.001)。5例腎臟微小病變的患者均未見(jiàn)腎小球有明顯凋亡細(xì)胞及凋亡小體沉積。
　　 研究結(jié)論:抗Clq抗體與狼瘡腎炎PBMCs凋亡率和腎組織中的凋亡細(xì)胞及凋亡小體的積聚增加相關(guān)。推測(cè)血清抗Clq抗體通過(guò)削弱Clq對(duì)巨噬細(xì)