84K楊UPB1-Like基因的克隆及遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、學(xué)校代碼：10225學(xué)號(hào)：S14785學(xué)位論文84K楊UPB1一Like基因的克隆及遺傳轉(zhuǎn)化指導(dǎo)教師姓名：申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：董洋王柏臣研究員中科院植物研究所碩士2014年6月東北林業(yè)大學(xué)學(xué)科專業(yè)：論文答辯日期：授予學(xué)位日期：答辯委員會(huì)主席：論文評(píng)閱人：聾方厶櫛素大學(xué)林木遺傳育種2014年6月13日2014年6月摘要摘要UPBEATI(UPBl)是一種調(diào)節(jié)擬南芥根部細(xì)胞分生分化平衡的轉(zhuǎn)錄因子，它直接作用于一系列過(guò)氧

2、化物酶進(jìn)而來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞伸長(zhǎng)區(qū)和分化區(qū)之間活性氧的表達(dá)。研究表明，當(dāng)UPBI的活性遭到破壞時(shí)，活性氧的平衡受到影響，從而導(dǎo)致分化的延遲。值得注意的是UPBl調(diào)控活性氧平衡的途徑是獨(dú)立于植物生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素信號(hào)途徑的。本研究利用生物信息學(xué)的方法在楊樹(shù)數(shù)據(jù)庫(kù)中查找到擬南芥UPBl的同源基因UPBl一Likel與UPBlLike2，并克隆這兩個(gè)基因，獲得了417bp的UPBlLikelCDS序列和408bp的UPBl一Like2CDS序列。半定

3、量PCR結(jié)果顯示，UPBILike基因在楊樹(shù)幼莖和根部表達(dá)量較高，表明該基因可能在楊樹(shù)的根部和莖部具有重要的生物學(xué)功能。瞬時(shí)表達(dá)結(jié)果顯示楊樹(shù)UPBlLike基因定位于細(xì)胞核及細(xì)胞膜上。為深入探討其生物學(xué)功能，本研究利用Gatewaycloningsystem成功構(gòu)建了楊樹(shù)UPBl一Like的過(guò)表達(dá)(35S：UPBl一Like—GFP)及抑制表達(dá)(RNAi—Likel2pGWB2)載體，并將其在楊樹(shù)及擬南芥植株中進(jìn)行了過(guò)表達(dá)和抑制表達(dá)，共

4、獲得20個(gè)突變株系。與野生型相比，過(guò)表達(dá)UPBlLike基因的楊樹(shù)突變株系中均表現(xiàn)出莖短而細(xì)、節(jié)間距短、根短且根毛豐富等生物性狀；而抑制表達(dá)UPBlLike基因的楊樹(shù)莖長(zhǎng)而粗，節(jié)間距較長(zhǎng)。這些結(jié)果表明，UPBlLike對(duì)楊樹(shù)根部和莖部的生長(zhǎng)發(fā)育具有重要的調(diào)控作用。尤其對(duì)于其生長(zhǎng)量的累積調(diào)控具有重要作用。因此，本項(xiàng)研究對(duì)于培育速生優(yōu)質(zhì)的林木新品種具有重要的生產(chǎn)實(shí)踐意義。同時(shí)對(duì)于揭示楊樹(shù)細(xì)胞分化和生長(zhǎng)平衡的調(diào)節(jié)機(jī)制也具有重要的意義。關(guān)鍵詞8