中國(guó)明對(duì)蝦（Fenneropenaeus chinensis）兩個(gè)DEAD-box家族基因Fc-vasa和Fc-PL10a的克隆和表達(dá)分析.pdf

1、DEAD-box家族蛋白是一類ATP依賴的RNA解旋酶，廣泛存在于從細(xì)菌到哺乳動(dòng)物的許多物種中，參與RNA代謝的幾乎所有過程。其中的vasa和PL10基因?qū)τ谏臣?xì)胞的發(fā)生具有重要作用。由于vasa基因在許多動(dòng)物生殖系細(xì)胞中的表達(dá)特異性，它被廣泛用作生殖細(xì)胞的分子標(biāo)記物，在動(dòng)物生殖細(xì)胞發(fā)生和生殖調(diào)控等研究中起到了重要的作用。中國(guó)明對(duì)蝦(Fenneropenaeus chinensis)是我國(guó)最重要的經(jīng)濟(jì)蝦類之一，對(duì)其生殖和發(fā)育的研究具有

2、重要意義。本文采用同源克隆策略，篩選和克隆了中國(guó)明對(duì)蝦兩個(gè)DEAD-box家族基因Fc-vasa和Fc-PL10a的全長(zhǎng)cDNA序列，并對(duì)其進(jìn)行了序列特征和表達(dá)分析。 克隆得到的Fc-vasa基因cDNA序列全長(zhǎng)2893 bp，含有開放閱讀框2139 bp，可以編碼712個(gè)氨基酸，F(xiàn)c-PL10a基因cDNA序列全長(zhǎng)2398 bp，其中開放閱讀框長(zhǎng)1983 bp，編碼660個(gè)氨基酸。兩基因推導(dǎo)的氨基酸序列具有DEAD-box家族

3、蛋白共有的全部九個(gè)保守結(jié)構(gòu)域和RGG重復(fù)序列，F(xiàn)c-VASA、Fc-PL10A具有VASA和PL10蛋白共同保守的ARKF框，F(xiàn)c-VASA的N端區(qū)域存在3個(gè)VASA蛋白特有的鋅指結(jié)構(gòu)(CCHC框)。同源性比對(duì)和進(jìn)化分析顯示兩基因編碼蛋白分別與其他物種的VASA和PL10相關(guān)蛋白具有較高的相似性，證明VASA和PL10蛋白在進(jìn)化上高度保守。蛋白三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)蛋白功能顯示兩個(gè)蛋白Fc-VASA和Fc-PL10A具備了DEAD-box家族蛋白

4、RNA連接，ATP酶和解旋酶的功能。 半定量RT-PCR分析顯示，F(xiàn)c-vasa基因在成體性腺組織中特異表達(dá)，表達(dá)量隨著性腺成熟逐漸降低；原位雜交結(jié)果表明Fc-vasa mRNA主要在精原細(xì)胞和卵母細(xì)胞的胞質(zhì)中表達(dá)顯著，因此，推測(cè)該基因可能參與中國(guó)明對(duì)蝦兩性配子的發(fā)生。胚胎和幼蟲RT-PCR分析檢測(cè)到2細(xì)胞期至膜內(nèi)無節(jié)幼的各期胚胎都含有 Fc-vasa mRNA。但表達(dá)量逐漸降低，自出膜后的無節(jié)幼體開始檢測(cè)不到表達(dá)信號(hào)，根據(jù)以上