中國明對蝦(Fenneropenaeus chinensis)卵巢及肝胰腺消減文庫的構建及分析.pdf

1、中國明對蝦,是我國重要的海水養(yǎng)殖種類,屬節(jié)肢動物門、甲殼綱、十足目、對蝦科、明對蝦屬。本研究中通過外部觀察、性腺指數以及石蠟切片的方法并參照前人研究將中國明對蝦的卵巢發(fā)育分為卵原細胞增殖期、卵黃發(fā)生前期、初級卵黃發(fā)生期、次級卵黃發(fā)生期和消退期等五個時期。然后利用抑制性消減雜交技術(SSH)分別構建卵原細胞增殖期和初級卵黃發(fā)生期的卵巢和肝胰腺的正反向消減文庫以及卵黃發(fā)生前期和消退期卵巢和肝胰腺的正反向消減文庫,測序結果與GenBank進行

2、BLASTx同源比較,并利用GO分析進行功能注釋,最后選取部分差異表達的基因進行熒光定量 PCR技術,研究差異表達的基因在卵巢各個不同發(fā)育時期的表達水平及變化,分析這些基因的表達特性與功能之間的關系,以及與卵巢發(fā)育之間的關系。
　　消減結果顯示,各文庫中的差異表達基因與該文庫的卵巢發(fā)育時期相互吻合。卵原細胞增殖期的卵巢消減文庫中篩選到的基因主要參與細胞進程,尤其是與細胞增殖分化(有絲分裂)相關。卵黃發(fā)生前期、初級卵黃發(fā)生期和消退期

3、篩選到的基因主要是參與蛋白合成、能量代謝及信號傳導等基因,推測這些基因可能在卵黃發(fā)生和皮質棒的形成等過程中有重要作用。
　　利用熒光定量 PCR分別檢測了 peritrophin mRNA、cytochrome oxidase I mRNA、polehole-like protein mRNA和vitellogenin mRNA等差異表達的基因在卵巢各不同發(fā)育時期的表達水平及變化。這些基因表達量在初級卵黃發(fā)生期都是最高的。其中po