2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、生物在其生命周期中,基因按時(shí)間和空間的順序有序地進(jìn)行表達(dá),從而也決定了生命活動(dòng)的多樣性和復(fù)雜性。在魚(yú)類(lèi)性腺發(fā)育過(guò)程中,基因的時(shí)空表達(dá)方式也受到嚴(yán)格而精確的調(diào)控,不同的發(fā)育階段,其表達(dá)基因各不相同。通過(guò)比較卵巢不同發(fā)育時(shí)期的基因表達(dá)差異,即可能尋找到與卵巢發(fā)育密切相關(guān)的基因,因此,本文選取黃河鯉不同發(fā)育時(shí)期的卵巢進(jìn)行差異基因研究。本研究從mRNA水平上,分別以未分化性腺和二期卵巢為驗(yàn)證方(Tester),以成魚(yú)卵巢為驅(qū)動(dòng)方(Driver)

2、,構(gòu)建抑制性消減雜交文庫(kù);利用Sorthern斑點(diǎn)雜交篩選后測(cè)序得到文庫(kù)中的序列。借助GO信號(hào)通路分析其功能,從中選取與卵巢發(fā)育相關(guān)的候選基因,利用實(shí)時(shí)熒光定量qRT-PCR驗(yàn)證其表達(dá)。進(jìn)而挑選Bmp基因進(jìn)行詳細(xì)研究,結(jié)合已有的黃河鯉轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)驗(yàn)證得到Bmp家族12個(gè)基因的cDNA序列,通過(guò)qRT-PCR分析其表達(dá)情況,挑選Bmp2、Bmp4和Bmp15進(jìn)行深入研究。借助鯉魚(yú)基因組信息對(duì)Bmp2、Bmp4和Bmp15所在染色體的基因結(jié)構(gòu)

3、、染色體同線性分析,通過(guò)組織原位雜交和免疫組織化學(xué)染色方法對(duì)其進(jìn)行時(shí)空表達(dá)定位;利用Bmp信號(hào)通路抑制劑DSM體外處理性腺,初步探究Bmp信號(hào)通路對(duì)黃河鯉性別分化和早期卵巢發(fā)育的作用。
  本研究主要內(nèi)容包括:⑴成功構(gòu)建黃河鯉魚(yú)未分化性腺和二期卵巢的抑制性消減雜交文庫(kù),經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化搖菌,兩個(gè)文庫(kù)一共得到約1200個(gè)單克隆,用巢式PCR進(jìn)行初步篩選,得到約600個(gè)含有插入片段的陽(yáng)性克隆;之后借助Sorthern斑點(diǎn)雜交,進(jìn)一步驗(yàn)證選出差

4、異顯著的150個(gè)克隆送公司測(cè)序。⑵測(cè)序得到的序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析,在Genebank中進(jìn)行Blast比對(duì),除去重復(fù)和一些微衛(wèi)星序列,兩個(gè)庫(kù)共得到78個(gè)unigene。GO分析文庫(kù)基因的生物信號(hào)通路,分類(lèi)分屬17類(lèi),其中較多基因ESTs序列分屬于蛋白質(zhì)水解作用,信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)等。結(jié)合其基因功能分析和相關(guān)研究,選取與卵巢發(fā)育相關(guān)的22個(gè)候選基因(Bmp2,Pvalb, Midlip1l,Pax2,Zgc,Desmin,Bmp

5、4等)進(jìn)行文庫(kù)驗(yàn)證,并對(duì)其功能進(jìn)行初步分析。⑶選取可能參與卵巢發(fā)育的Bmp家族基因,在黃河鯉魚(yú)未分化性腺、幼魚(yú)和成魚(yú)雌雄性腺中對(duì)其表達(dá)模式定量分析,發(fā)現(xiàn)Bmp2、Bmp4和Bmp15分別在二期卵巢、未分化性腺和成熟卵巢中有高表達(dá),故挑選Bmp2、Bmp4和Bmp15進(jìn)行深入研究,驗(yàn)證得出Bmp2、Bmp4和Bmp15分別為2068、2037、2165的全長(zhǎng)序列,各編碼410、399和384個(gè)氨基酸,且羧基端均含有TGF-β結(jié)構(gòu)域。分析基

6、因Bmp4基因在基因組骨架上有一個(gè)重復(fù)出現(xiàn),且其同線性分析染色體位置和其他物種差異較大。Bmp2和Bmp15分別位于黃河鯉第40號(hào)染色體和第5號(hào)染色體,同線性分析展示了和斑馬魚(yú)高度的進(jìn)化相似性。⑷原位雜交和免疫組化定位發(fā)現(xiàn)Bmp2、Bmp4和Bmp15三個(gè)基因表達(dá)位置相似,在二期卵巢中均集中在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá),成熟卵巢時(shí)期集中表達(dá)在卵泡周?chē)钠べ|(zhì)小泡中,結(jié)合其表達(dá)量推測(cè)Bmp2是黃河鯉卵巢早期發(fā)育的重要調(diào)控基因;Bmp15基因則作為卵泡早期

7、生長(zhǎng)調(diào)控基因可能參與黃河鯉卵巢中卵泡大小的發(fā)育。⑸黃河鯉魚(yú)未分化性腺中Bmp信號(hào)通路受到DSM成功抑制后,三個(gè)雄性標(biāo)志基因(Amh,Dmrt1,Sox9a)在高濃度或者高劑量時(shí)出現(xiàn)顯著或極顯著表達(dá)上調(diào),雌性基因Cyp19和Foxl2表達(dá)量顯著降低,性腺在分子水平上出現(xiàn)偏向雄性分化的趨勢(shì),說(shuō)明Bmp信號(hào)通路對(duì)于未分化性腺向雌雄分化起重要調(diào)節(jié)作用;對(duì)二期卵巢處理后也顯示出抑制卵巢發(fā)育,故推測(cè)Bmp信號(hào)通路對(duì)于維持雌性卵巢早期正常發(fā)育有著重要

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