蘋果銹果類病毒PCR檢測及防控研究.pdf

1、蘋果是我國重要的經(jīng)濟(jì)樹種。近年來，蘋果銹果類病毒(Apple scar skin viroid,ASSVd)引起的蘋果銹果病嚴(yán)重影響著蘋果的產(chǎn)量和果實(shí)品質(zhì)，且蘋果銹果類病毒一旦侵染樹體，尚無有效的根治措施。蘋果銹果病嚴(yán)重威脅蘋果產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。因此，探究蘋果銹果病的防治方法迫在眉睫。本研究建立了蘋果銹果類病毒的實(shí)時(shí)熒光定量方法，并利用該方法測定了嘎啦和中秋王果皮中蘋果銹果類病毒含量特征。本試驗(yàn)以攜帶等量ASSVd的紅珍珠海棠組培苗為試材

2、，設(shè)置單因素試驗(yàn)，調(diào)整了繼代培養(yǎng)基中Zn、B、Mn微量元素的含量和NAA、IBA、6-BA、IAA植物生長調(diào)節(jié)劑的含量，繼代30天時(shí)，利用實(shí)時(shí)熒光定量測定組培苗中ASSVd的含量。同時(shí)，田間根施生物有機(jī)肥A和土壤調(diào)理劑B探究兩種肥料在不同配比和不同年限下對(duì)銹果病的矯治效果，葉面噴施微量元素探究不同濃度的Zn和B對(duì)銹果病的矯治效果，果實(shí)成熟時(shí)測果實(shí)銹果病發(fā)病率，果實(shí)品質(zhì)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.建立蘋果銹果類病毒SYBR Gre

3、enⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法。利用本實(shí)驗(yàn)室前人設(shè)計(jì)的ASSVd特異性引物，以體外轉(zhuǎn)錄的RNA為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并對(duì)體系的重復(fù)性和靈敏性進(jìn)行驗(yàn)證。研究表明:建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)達(dá)0.998，擴(kuò)增效率為88％;可以檢測到3.43×104拷貝/微升的病毒;重復(fù)性好，組內(nèi)重復(fù)和組間重復(fù)Ct值的變異系數(shù)均小于1.41％。
　　2.感病蘋果果皮上蘋果銹果類病毒含量特征。以感病嘎啦和中秋王為試料，利用實(shí)時(shí)熒光定量方法檢測果實(shí)膨大期和果

4、實(shí)采摘期的無病斑部位、病斑部位和感病無斑果的果皮中ASSVd含量，結(jié)果表明:嘎啦和中秋王果實(shí)采摘期三部位果皮的平均ASSVd含量均大于果實(shí)膨大期;果實(shí)膨大期，果皮病斑處比無病斑處平均ASSVd含量高，無病斑處與感病無斑果的平均ASSVd含量無明顯差異;果實(shí)采摘期，嘎啦果皮中ASSVd的含量特征與果實(shí)膨大期相同，中秋王果皮的ASSVd含量特征與果實(shí)膨大期不同，感病無斑果、無病斑處與病斑處ASSVd的含量無依次增高。說明隨著果實(shí)的生長，AS

5、SVd的整體含量增加;發(fā)病部位比不發(fā)病部位的平均蘋果銹果類病毒含量高。
　　3.探究植物生長調(diào)節(jié)劑(NAA、6-BA、IAA、IBA)對(duì)組培苗中ASSVd含量的影響。當(dāng)NAA濃度為0.05 mg/L時(shí)，調(diào)整6-BA濃度使其范圍在(0-1.5) mg/L，蘋果銹果類病毒含量無明顯變化;當(dāng)6-BA含量為0.5 mg/L時(shí)，調(diào)整NAA濃度使其范圍在（0-0.3）mg/L，NAA濃度達(dá)到0.1mg/L時(shí)，蘋果銹果類病毒的含量顯著高于其他處

6、理。NAA、IAA、IBA濃度在0.5 mg/L時(shí)，蘋果銹果類病毒含量無明顯變化。因此，培養(yǎng)基中植物生長調(diào)節(jié)劑的種類和濃度影響蘋果銹果類病毒的含量。
　　4.探究微量元素(Zn、Mn、B)對(duì)組培苗中ASSVd含量的影響。結(jié)果表明:蘋果銹果類病毒含量隨著Zn含量的升高總體呈下降趨勢。相關(guān)性分析表明，組培苗中的Mn、B、Cu、Fe含量與蘋果銹果類病毒的含量不相關(guān)，Zn與ASSVd在0.05水平上顯著負(fù)相關(guān)。說明增加培養(yǎng)基中Zn的濃度可

7、以降低組培苗中ASSVd的含量。
　　5.田間根施生物有機(jī)肥A和土壤調(diào)理劑B對(duì)蘋果銹果病的矯治效果研究
　　(1)以發(fā)病的10年生矮砧密植紅富士為試材，探究生物有機(jī)肥A微生物菌肥和土壤調(diào)理劑B土壤調(diào)節(jié)劑連續(xù)施入不同年限后對(duì)蘋果銹果病的影響。結(jié)果表明:與對(duì)照相比較，其中施用一年的感病指數(shù)就降低了53.75％，防控率達(dá)到59.07％，施用三年的感病指數(shù)降低了90.5％，防控率高達(dá)99.45％。說明施用生物有機(jī)肥A和土壤調(diào)理劑B可

8、以改善蘋果銹果病，且施肥時(shí)間越長防控率越高，連續(xù)施用三年以上，基本可以使感病果樹不顯癥狀，同時(shí)提高果實(shí)品質(zhì)。
　　(2)以發(fā)病的5年生矮砧密植紅富士為試材，探究生物有機(jī)肥A(5kg、7.5kg)和土壤調(diào)理劑B(1.5kg、2.5kg、3.5kg)不同配比對(duì)蘋果銹果病的影響。結(jié)果表明:單株施用生物有機(jī)肥A和土壤調(diào)理劑B7.5kg和3.5 kg時(shí)的蘋果銹果病感病指數(shù)最低，防控率達(dá)到24.06％，與對(duì)照相比降低了15.76％。說明施用生

9、物有機(jī)肥A和土壤調(diào)理劑B可以改善蘋果銹果病，施肥量越大防控率越高。
　　6.葉面噴施Zn、B元素對(duì)銹果病的矯治效果研究。以發(fā)病的5年生矮砧密植短枝富士為試材，通過葉面噴施探究不同濃度微量元素Zn、B對(duì)蘋果銹果病的影響，結(jié)果表明:ZnSO4·7H2O、H2BO3濃度在3.5 g/L、1.25 g/L的感病指數(shù)最低，達(dá)到29.44％，指數(shù)降低也最大，達(dá)到33.05％，防控率最高，達(dá)到52.89％;濃度在0.35 g/L、0.125 g