葡萄根瘤蚜的熒光定量PCR檢測及間種植物防控研究.pdf

1、葡萄根瘤蚜Daktulosphaira vitifoliae(Fitch)，屬于同翅目(Homoptera)，根瘤蚜科(Phylloxeridae)，原產于北美洲落基山脈東部，是葡萄上的毀滅性害蟲，為專食性害蟲，只危害vitis屬植物，是我國植物檢疫性有害生物。1935年在我國首次發(fā)現葡萄根瘤蚜后，通過采取砍伐葡萄，使葡萄根瘤蚜銷聲匿跡，2005年在我國再次發(fā)生葡萄根瘤蚜危害。目前世界上主要利用嫁接抗性砧木防治葡萄根瘤蚜，沒有其他有效防

2、治方法。由于我國葡萄大多以扦插方式栽培，嫁接抗性砧木面積較少，葡萄根瘤蚜對我國迅速發(fā)展的葡萄產業(yè)構成嚴重威脅。同時，目前主要依靠常規(guī)土壤及根系調查葡萄根瘤蚜，但常規(guī)地面方法費時費力。因此，為了給葡萄根瘤蚜監(jiān)測提供快速、準確、敏感性高的分子生物學調查方法，以及為葡萄根瘤蚜防控探索有效的方法，本試驗對實時熒光定量PCR方法檢測葡萄根瘤蚜、以及在葡萄園間作植物防控葡萄根瘤蚜進行了研究。主要結果總結如下：
　　 1.參考Karen He

3、rbert等的方法，根據葡萄根瘤蚜ITS2中的保守序列設計的特異性引物與TaqMan-MGB熒光探針，通過試驗驗證上述引物和探針適用于我國葡萄根瘤蚜的檢測，并且成功構建了標準質粒，制作出以標準陽性質粒作為標準品的標準曲線，經優(yōu)化反應條件，建立了一種絕對定量檢測葡萄根瘤蚜的實時熒光PCR方法。并對該方法進行敏感性和重復性試驗，結果顯示，該方法的靈敏度可達1.625 copies/μl，3次重復檢測的變異系數均小于5％。提取0.25 g含有

4、10頭葡萄根瘤蚜若蟲土壤的DNA，并將其梯度稀釋，用建立的實時熒光定量PCR方法進行檢測，結果表明，將DNA稀釋103倍后，仍能檢測出陽性結果，同時，對受害葡萄根際土壤檢測結果也為陽性。葡萄根瘤蚜TaqMan-MGB探針實時熒光PCR檢測技術具有特異性強，敏感性高，易操作等優(yōu)點，有很好的應用前景和研究價值。
　　 2.按照殺蟲活性，經濟合理性，耐陰性，植株高度等篩選原則，選取裂葉荊芥、黃芩和黃芪三種植物作為防控葡萄根瘤蚜的間作植