β-catenin在發(fā)育性髖關節(jié)脫位動物模型早期軟骨退行性變中機制的實驗研究.pdf

1、復旦大學博士學位論文βcatenin在發(fā)育性髖關節(jié)脫位動物模型早期軟骨退行性變中機制的實驗研究姓名：寧波申請學位級別：博士專業(yè)：兒科學指導教師：馬瑞雪20120401復旦大學博士論文退行性改變的影響18周對照組大鼠髖關節(jié)軟骨細胞的提取及原代培養(yǎng)，工I型膠原免疫熒光及甲苯胺藍染色鑒定，免疫熒光及qRT—PCR檢測MMPl3及X型膠原的表達，qRT—PCR檢測ADAMTS5的表達，TUNEL法檢測軟骨細胞凋亡。2LiCl處理正常發(fā)育8周鼠關

2、節(jié)軟骨細胞，激活0一catenin的表達，qRT—PCR檢測X型膠原、刪P一13和ADAMTS5的表達；檢測軟骨細胞凋亡情況。3SPSS160統(tǒng)計和比較組間差異。[結果]一、DDH動物模型的制作及病理組織學觀察1建模成功率100％(20只新生大鼠固定10天)。2髖關節(jié)大體觀察：實驗組關節(jié)囊增厚，髖臼淺平，軟組織嵌入，股骨頭外形扁平，隨年齡增長頭臼匹配差距增大；測量結果顯示2、4周大鼠髖臼及股骨頭大小較對照組發(fā)育小，但仍呈發(fā)育增大趨勢，6

3、周后髖臼發(fā)育基本停止，髖臼大小開始變小，股骨頭發(fā)育停止，頭臼不對稱進一步加重(PO01)。3SafraninO／Fastgreen染色可見到實驗組關節(jié)軟骨退變征象：Safranin0染色淺層部分染色降低，表明帶負電荷蛋白多糖明顯降低、4周后關節(jié)軟骨淺層裂隙形成、淺層中層軟骨細胞簇聚及數量減少、關節(jié)軟骨退變隨鼠齡增長而加重。二、x型膠原、基質金屬蛋白酶～13(刪P一13)、ADAMTS一4、ADAMTS一5、B—catenin在不同時期D

4、DH髖關節(jié)軟骨中的表達1實驗組x型膠原、MMP13在軟骨層軟骨細胞中不均勻表達，成簇細胞表達明顯，胞漿內明顯棕色深染細胞數目百分比較對照組多。4周及以后與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(PO01)，且隨鼠齡增長而表達增高。2實時熒光定量PCR結果顯示實驗組X型膠原和MMP13mRNA在4周及以后表達較對照組增加，且隨鼠齡增長表達增加：ADAMTS5在8周時表達增高，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(PO01)。ADAMTS一4與實驗組比較無統(tǒng)計

5、學差異。3B—catenin：免疫組織化學中可見B—catenin在對照組大鼠2周時表達較多，隨鼠齡增長表達逐漸下降，8周時免疫組化基本無表達；實驗組Bcatenin表達無下降趨勢，持續(xù)高表達；實時熒光定量PCRmRNA表達呈相似結果。三、體外軟骨細胞培養(yǎng)，檢測B—catenin對軟骨細胞退行性改變的影響1軟骨細胞培養(yǎng)及鑒定：軟骨細胞培養(yǎng)后II型膠原免疫熒光及甲苯胺藍染色鑒定為軟骨細胞。2LiCl激活p—catenin表達：LiCl處理