終末期肝病患者肝組織和血清中乙型肝炎病毒轉(zhuǎn)錄體的對(duì)照研究.pdf

1、目的:1996年Schutz等建立用于檢測(cè)肝組織內(nèi)HBV全長(zhǎng)型和頓挫型轉(zhuǎn)錄體的方法;此后,Su和Zhang等于2001年建立了從血清中檢測(cè)這兩種轉(zhuǎn)錄體的方法.該研究采用上述兩種研究方法,分別選擇HBsAg陰性和HBsAg陽(yáng)性的肝癌、肝硬變、其他肝病患者及非肝病患者,以及其中部分手術(shù)治療患者,收集其血清標(biāo)本和手術(shù)切除的肝組織標(biāo)本,提取核酸后經(jīng)PCR檢測(cè)其中XDNA、fRNA和trRNA,分析其產(chǎn)物與終末期肝病的關(guān)系.并首次對(duì)來(lái)源于同一患者

2、的血清標(biāo)本和肝組織標(biāo)本中的病毒轉(zhuǎn)錄體進(jìn)行對(duì)照研究,進(jìn)一步闡明HBV轉(zhuǎn)錄體存在的意義.方法:實(shí)驗(yàn)一:病例選取該校唐都醫(yī)院和西京醫(yī)院普通外科2002/12-2003/08住院病人145(男102,女43)例,年齡8~73(平均46.85)歲;肝癌67例,肝硬化46例,其他肝病患者19例,非肝病患者13例.145例中HBsAg陽(yáng)性者70例,其中HBsAg陽(yáng)性/HBeAg陽(yáng)性20例HBsAg陰性者75例,其中HBV免疫學(xué)完全陰性32例.血清標(biāo)本

3、收集:抽取患者靜脈血 5ml,置于滅菌干燥無(wú)抗凝特制離心管內(nèi),取血后迅速于低溫離心機(jī)4 ℃,3000g,離心25min,吸取上層血清并分裝.-70℃保存?zhèn)溆?血清核酸提取及PCR:采用High pure viral nucleic acid kit提取血清核酸,終產(chǎn)物為50ul.以此核酸提取物為模板,txs+和txas-為引物,經(jīng)PCR擴(kuò)增HBx DNA.應(yīng)用Titan One Tube RT-PCR System,txs+/txs<,

4、2>+和txas<,5>-為引物,經(jīng)一步法擴(kuò)增fRNA和trRNA.PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖電泳顯示結(jié)果.實(shí)驗(yàn)二:選取實(shí)驗(yàn)一中部分手術(shù)患者49(男32,女17)例,年齡8~62(平均46.27)歲;其中肝癌16例,肝硬化25例,肝良性瘤4例,其他4例,49例中HBsAg陽(yáng)性27例,其中HBsAg陽(yáng)性/HBeAg陽(yáng)性5例;HBsAg陰性22例,包括HBV血清學(xué)標(biāo)志物完全陰性者12例.肝組織標(biāo)本處理:肝組織標(biāo)本手術(shù)切除后,立即置于液氮運(yùn)輸,-70