5-烯丙基-7-二氟亞甲基白楊素抑制體外培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡作用研究.pdf

1、目的:探討白楊素( Chrysin)衍生物5-烯丙基-7-二氟亞甲基白楊素(5-allyl-7-gen-difluoromethylenechrysin,ADFMChR)體外抑制人卵巢癌細(xì)胞系COC1細(xì)胞及其耐藥亞株COC1/DDP細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡作用及機(jī)制。
　　方法:(1)改良MTT比色法檢測(cè)不同劑量ADFMChR和1μM TAX對(duì)人卵巢癌細(xì)胞系(COC1)、順鉑耐藥亞株(COC1/DDP)及中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞系(CHO-K1

2、)細(xì)胞增殖抑制作用。(2)流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分析不同劑量ADFMChR和1μM TAX作用COC1、COC1/DDP及CHO-K1細(xì)胞不同時(shí)間對(duì)細(xì)胞周期和凋亡的影響。(3)異硫氰酸熒光素(FITC)及羅丹明熒光素(TRITC)間接標(biāo)記FCM檢測(cè)不同劑量ADFMChR作用COC1、COC1/DDP、CHO-K1細(xì)胞24、48小時(shí), NF-кB、Bcl-2、PPARr、COX2蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:(1) ADFMChR(5μM、1

3、0μM、20μM、40μM、80μM)處理COC1、COC1/DDP細(xì)胞24、48、72小時(shí),表現(xiàn)細(xì)胞增殖抑制,呈劑量依賴性和時(shí)間依賴性,其24、48、72小時(shí)對(duì)COC1細(xì)胞IC50值分別為26.66±2.12μM、5.72±1.12μM、3.67±0.96μM,對(duì)COC1/DDP細(xì)胞IC50值分別為27.4±3.2μM、7.02±1.26μM、6.15±0.72μM;對(duì)正常卵巢細(xì)胞CHO-K1的抑制作用較弱,IC50值分別為617.7

4、6±2.65μM、277.00±1.98μM、67.63±1.76μM。ADFMChR對(duì)人卵巢癌細(xì)胞毒選擇指數(shù)(SI=IC50(CHO-K1)/IC50(COC1))24、48、72小時(shí)分別為23.18、48.43、23.35;而紫杉醇對(duì)人卵巢癌細(xì)胞毒選擇指數(shù)(SI)48h為7.35。ADFMChR對(duì)人卵巢癌細(xì)胞耐藥指數(shù)(RI=IC50(COC1/DDP)/IC50(COC1))24、48、72小時(shí)分別為1.03、1.23、1.68;而

5、TAX對(duì)人卵巢癌細(xì)胞48h的耐藥指數(shù)(RI)為0.97。(2)FCM分析表明ADFMChR(2.5μM、5.0μM、10μM)可選擇性誘導(dǎo)COC1、COC1/DDP細(xì)胞凋亡和周期阻滯,且選擇性較TAX好。(3)TRITC、 FITC間接標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定ADFMChR(2.5μM、5.0μM、10μM)處理COC1、COC1/DDP細(xì)胞,隨著藥物濃度升高、作用時(shí)間延長(zhǎng),NF-кB、Bcl-2、COX2蛋白表達(dá)逐漸下調(diào),PPARr蛋白表達(dá)

6、逐漸上調(diào)。
　　結(jié)論:(1)ADFMChR對(duì)人卵巢癌細(xì)胞系COC1細(xì)胞及其順鉑耐藥亞株COC1/DDP細(xì)胞均有增殖抑制作用,對(duì)正常卵巢細(xì)胞系CHO-K1細(xì)胞抑制作用較弱,是一種選擇性較高的治療卵巢癌的新候選藥物。(2)ADFMChR可誘導(dǎo)人卵巢癌COC1細(xì)胞凋亡,并使其發(fā)生G1期阻滯。(3)ADFMChR可誘導(dǎo)人卵巢癌COC1/DDP細(xì)胞凋亡,并使其發(fā)生S期阻滯。(4)通過(guò)活化PPARr,下調(diào)NF-кB,進(jìn)而下調(diào)COX2和Bcl-