酒精對心肌組織影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過給小鼠腹腔注射不同濃度乙醇,建立一個早期的大量飲酒的動物模型,運(yùn)用電鏡和光鏡技術(shù)觀察心肌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)的變化,用酶細(xì)胞化學(xué)染色方法觀察心肌細(xì)胞細(xì)胞色素C氧化酶的活性變化,采用免疫組織化學(xué)方法觀察酒精對細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)基因BCL-2和BAX表達(dá)的影響,研究酒精對心臟毒性作用的機(jī)理.方法:將60只健康雄性昆明種小白鼠隨機(jī)分為4組:酒精Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組和對照組,分別給予10％、20%、30%濃度酒精和生理鹽水腹腔注射,每日一次

2、,連續(xù)處理30天后取材.部分標(biāo)本制成石蠟切片,經(jīng)HE染色,光鏡下觀察酒精對心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)影響;經(jīng)核固紅-結(jié)晶紫染色對心肌細(xì)胞凋亡情況進(jìn)行定量分析;用免疫組織化學(xué)的方法顯示酒精對心肌細(xì)胞凋亡相關(guān)基因BCL-2和BAX的表達(dá)情況,并利用圖像分析技術(shù)進(jìn)行定量分析.部分標(biāo)本制備透射電鏡標(biāo)本,電鏡下觀察酒精對心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響.其余標(biāo)本置于恒冷箱切片機(jī)內(nèi),分別切15μm及40μm厚冰凍切片,細(xì)胞色素C氧化酶染色,光鏡下觀察酶活性變化,并利用圖

3、像分析技術(shù)進(jìn)行定量分析;40μm厚冰凍切片,孵育后制作電鏡標(biāo)本,透射電鏡下觀察心肌細(xì)胞線粒體上細(xì)胞色素C氧化酶的活性變化.結(jié)論:1、心肌組織結(jié)構(gòu)的改變與酒精的攝入量成正相關(guān),攝入量較少時,光鏡和電鏡觀察均未出現(xiàn)明顯的心肌細(xì)胞的異常變化,但隨著攝入量的增大,心肌細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)即發(fā)生異常改變,且隨著濃度的增加,異常更加顯著.當(dāng)飲酒繼續(xù),結(jié)構(gòu)上的損傷會進(jìn)一步加劇.結(jié)構(gòu)的改變與心肌功能異常密切相關(guān),當(dāng)各種結(jié)構(gòu)損傷達(dá)到一定程度時必然會出現(xiàn)心肌功能

4、的改變.2、心肌細(xì)胞凋亡在酒精對心肌影響的發(fā)生機(jī)制上發(fā)揮一定的作用,隨著酒精濃度的增加,心肌細(xì)胞的凋亡征象愈加明顯,固縮核細(xì)胞數(shù)逐漸增加,我們推測酒精可能引起心肌細(xì)胞凋亡.3、長期大量飲酒能減弱線粒體的功能,改變其結(jié)構(gòu);而當(dāng)心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡時,線粒體結(jié)構(gòu)和功能也可發(fā)生改變,可以推斷出線粒體也參與了酒精引起心肌細(xì)胞凋亡的過程.4、酒精引起的心肌細(xì)胞凋亡與凋亡相關(guān)基因Bcl-2和Bax的異常表達(dá)有關(guān),二者在細(xì)胞凋亡中是相互拮抗的關(guān)系,酒精使