p,p’-DDE對離體培養(yǎng)大鼠支持細胞轉(zhuǎn)鐵蛋白和雄激素結(jié)合蛋白基因表達的影響.pdf

1、該研究試圖建立大鼠睪丸支持細胞體外培養(yǎng)模型,研究DDT的主要代謝產(chǎn)物p,p'-DDE對支持細胞幾種重要功能基因表達的影響,探討p,p'-DDE對支持細胞的基因組效應(yīng),進而研究p,p'-DDE導致生精障礙的可能作用機制.第一部分 大鼠睪丸支持細胞離體培養(yǎng)方法及p,p'-DDE的毒性作用 建立大鼠睪丸支持細胞體外原代培養(yǎng)模型,18-20日齡SD大鼠睪丸經(jīng)胰蛋白酶和膠原酶依次消化,分離和純化支持細胞.在5％CO2,35℃條件下進行培養(yǎng),

2、并經(jīng)富爾根染色進行支持細胞鑒定.第二部分P,P,-DDE對支持細胞轉(zhuǎn)鐵蛋白和雄激素結(jié)合蛋白基因表達的影響為p,p'-DDE對支持細胞基因轉(zhuǎn)鐵蛋白和雄激素結(jié)合蛋白基因轉(zhuǎn)錄的影響,該研究對離體原代培養(yǎng)的大鼠支持細胞給予不同劑量(DMSO為對照,p,p'-DDE劑量分別為10、30、50μmol/L)的p,p'-DDE染毒24h,提取細胞內(nèi)總RNA,以β-actin為內(nèi)對照,用一步法RT-PCR檢測支持細胞內(nèi)轉(zhuǎn)鐵蛋白和雄激素結(jié)合蛋白mRNA水

3、平.結(jié)果表明p,p'-DDE可導致支持細胞的基因表達異常,轉(zhuǎn)鐵蛋白的表達明顯降低可能是導致生精過程障礙的重要機制,而支持細胞細胞也可能產(chǎn)生一定的保護性適應(yīng),如促進雄激素結(jié)合蛋白的表達以結(jié)合更多的雄激素來維持生精過程.綜上所述,該研究結(jié)果表明:1.建立的支持細胞離體原代培養(yǎng)方法是可行的;2.p,p'-DDE對支持細胞的最大無細胞毒性作用劑量為50μmol/L;3.p,p'-DDE可以抑制支持細胞轉(zhuǎn)鐵蛋白基因的轉(zhuǎn)錄表達;4.支持細胞p,p'