卵轉(zhuǎn)鐵蛋白對(duì)樹突狀細(xì)胞成熟及免疫調(diào)節(jié)功能的影響.pdf

1、卵轉(zhuǎn)鐵蛋白(OVT)是禽蛋蛋清蛋白中主要的成分，具有多種生物活性。OVT通過抗原遞呈細(xì)胞進(jìn)行外來物質(zhì)（抗原）的吞噬處理和遞呈作用，傳遞信息給免疫細(xì)胞，激活機(jī)體的先天性免疫系統(tǒng)，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞因子的產(chǎn)生，影響淋巴細(xì)胞增殖、T細(xì)胞的成熟與分化，在生物體內(nèi)發(fā)揮著增強(qiáng)免疫功能、抵抗細(xì)菌和病毒感染的作用。樹突狀細(xì)胞(DCs)作為體內(nèi)最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞，能夠?qū)⒓?xì)胞內(nèi)外抗原特異性呈遞給幼稚型T細(xì)胞，引發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)。目前尚未見OVT對(duì)DCs發(fā)育、成熟、

2、遷移及免疫調(diào)節(jié)分子等的影響報(bào)道。本文通過體外培養(yǎng)小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度OVT刺激下DCs表面特征性分子表達(dá)量，ELISA測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子水平變化，MLRs測(cè)定成熟DCs引發(fā)同種異體小鼠脾臟T細(xì)胞增殖效果，Western-blot測(cè)定MAPK通路下p38MAPK、JNK和ERK以及它們的磷酸化蛋白含量，探討OVT對(duì)DCs成熟和免疫調(diào)節(jié)的影響，為后續(xù)的試驗(yàn)提供理論依據(jù)。研究結(jié)果如下：
　　(1)不同

3、濃度(10、25、50、100、200μg/mL)OVT單獨(dú)刺激DCs48h后，均能顯著提高DCs表面CD80、CD40和MHC-II分子表達(dá)量，促進(jìn)DCs的成熟；不同濃度OVT與LPS共同刺激DCs48h后，10～25μg/mL(低濃度) OVT刺激的DCs表面CD80、CD40和MHC-II分子表達(dá)量顯著高于陽性對(duì)照組(LPS單獨(dú)刺激組)，表現(xiàn)為協(xié)同LPS刺激效果，25～200μg/mL(高濃度)OVT刺激的DCs表面CD80、CD

4、40和MHC-II分子表達(dá)量顯著低于陽性對(duì)照組，表現(xiàn)為拮抗LPS刺激效果。因而，OVT單獨(dú)刺激或與LPS共刺激DCs均表現(xiàn)出促進(jìn)DCs成熟的效果，但共刺激下高濃度會(huì)減弱DCs的成熟度。
　　(2)不同濃度OVT單獨(dú)刺激成熟的DCs均能夠引發(fā)同種異體小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞增殖，不同濃度OVT在DCs：T細(xì)胞=1:25時(shí)，T細(xì)胞增殖率最高；LPS與不同濃度OVT共同刺激成熟的DCs在低濃度OVT時(shí)能顯著引發(fā)T細(xì)胞增殖，但高濃度OVT對(duì)T細(xì)

5、胞的增殖無顯著影響。以上結(jié)果表明，OVT單獨(dú)刺激或低濃度與LPS共刺激成熟的DCs顯著引發(fā)T淋巴細(xì)胞增殖，但高濃度共刺激DCs無引發(fā)T細(xì)胞增殖的能力。
　　(3)不同濃度OVT單獨(dú)刺激DCs48h后，DCs培養(yǎng)上清液中TNF-α含量隨濃度增加而升高，但在200μg/mL時(shí)，顯著下降；IL-10的表達(dá)量在200μg/mL時(shí)達(dá)到最大；IL-12p70的表達(dá)量不依賴OVT的劑量，在細(xì)胞上清液中大量存在，且與對(duì)照組無顯著差異，表明OVT單

6、獨(dú)刺激下促炎反應(yīng)占主導(dǎo)，在濃度最高時(shí)抗炎反應(yīng)起主導(dǎo)作用，抑制炎癥的繼續(xù)發(fā)展，但I(xiàn)L-12p70的表達(dá)量呈現(xiàn)不依賴OVT濃度。
　　(4) LPS與不同濃度OVT共刺激DCs48h，細(xì)胞上清中TNF-α含量呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì)，25μg/mL OVT為轉(zhuǎn)折點(diǎn)。IL-10含量隨OVT濃度增加上調(diào)，在OVT濃度為200μg/mL時(shí)達(dá)到最大，共刺激DCs產(chǎn)生的IL-12p70顯著高于單獨(dú)刺激各組，但共刺激組別間無顯著差異。表明OVT與L

7、PS共刺激下低濃度時(shí)主要發(fā)生促炎反應(yīng)，高濃度時(shí)抗炎反應(yīng)占主導(dǎo)地位且依賴OVT濃度，IL-12p70總體呈現(xiàn)不依賴共刺激物，但顯著高于OVT單獨(dú)刺激組的釋放量。
　　(5)25μg/mL OVT單獨(dú)刺激DCs一定時(shí)間(4h、8h、12h)后，檢測(cè)MAPK信號(hào)路徑下的p38MAPK、ERK、JNK及它們的磷酸化蛋白表達(dá)量，結(jié)果表明：OVT單獨(dú)刺激DCs時(shí)，ERK、p-ERK表達(dá)量下調(diào)，p-p38MAPK、JNK，p-JNK表達(dá)量上調(diào)，