一例慢性乙型肝炎重型化患者血清HBV準種的動力學研究.pdf

1、慢性乙型肝炎是否發(fā)病及發(fā)病的嚴重程度與病毒因素和宿主因素的共同作用有關.目前普遍認為慢性乙型肝炎患者的肝細胞損害是免疫介導的.乙型肝炎核心抗原(HBcAg)由HBV C基因編碼,是免疫攻擊的靶抗原,細胞毒性T淋巴細胞(CTL)可促使表達靶抗原的感染肝細胞死亡.C基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)存在于前C基因上游的基本核心啟動子(basal core promoter,BCP)內(nèi),該區(qū)突變可直接對C基因的轉(zhuǎn)錄及基因編碼產(chǎn)物的表達產(chǎn)生影響.前C基因的熱點突變

2、ntG1896A突變(A83突變)可導致原有的由TGG編碼的色氨酸轉(zhuǎn)換為終止密碼子(TAG),從翻譯水平造成HBeAg合成中斷.由于CTL在免疫識別上并不能區(qū)分HBcAg和HBeAg,因此HBeAg可以緩和CTL對感染肝細胞的免疫攻擊.為了初步探討HBV前C/C基因及C啟動子區(qū)準種與宿主肝病活動間的關系,該研究選擇了1例慢性乙型肝炎患者初次發(fā)病時、好轉(zhuǎn)時、發(fā)生重型肝炎時、重型肝炎好轉(zhuǎn)后2月、4月的共5份血清樣本進行研究,采用PCR-T載

3、體克隆-CSGE變異檢測-核酸序列分析的實驗流程,PCR擴增和克隆了以上血清樣本的HBV前C/C基因及BCP-ORF區(qū)片段,并從每份樣本的克隆產(chǎn)物中隨機選出33個克隆進行CSGE檢測,對CSGE篩選出的不同克隆進行序列分析,展示了該慢性乙型肝炎患者血清HBV準種隨肝病活動的動態(tài)變化,初步探討了HBV前C/C基因及C啟動子區(qū)準種隨宿主肝病活動的互動關系.結論:1.慢性乙型肝炎患者血清HBV前C/C基因及BCP區(qū)存在準種現(xiàn)象,且該區(qū)準種隨宿

4、主病程進展可發(fā)生動態(tài)變化,患者慢性乙型肝炎及重型肝炎發(fā)病時該區(qū)準種復雜性及異質(zhì)性低,而病情好轉(zhuǎn)后該區(qū)準種復雜性及異質(zhì)性升高,且隨時間的累積不斷上升.2.慢性乙型肝炎患者血清HBV前C/C基因及BCP區(qū)準種的優(yōu)勢株和弱勢株可隨病情變化而相互消長.3.慢性乙型肝炎患者血清HBV前C/C基因及BCP區(qū)準種可隨患者病情演變而發(fā)生漂變.4.G1896A、cP5T、cL60V和cS155T突變可能與宿主慢性乙型肝炎及重型肝炎發(fā)病有關,A1762T/