米諾環(huán)素對不完全脊髓損傷大鼠脊髓BDNF和NT-3表達的影響.pdf

1、神經(jīng)營養(yǎng)因子是具有神經(jīng)營養(yǎng)活性，與神經(jīng)細胞生長、存活相關(guān)的細胞因子的統(tǒng)稱，是一種重要的細胞因子。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）發(fā)育過程中，神經(jīng)因子對神經(jīng)元的存活和分化，生長發(fā)育起著重要的作用，而且也是成熟的中樞及周圍神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元維持生存和正常生理功能所必須的。神經(jīng)因子在成年大鼠神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)展和突觸可塑性形成中起著重要作用，它們保護損傷的神經(jīng)再生并且通過活化酪氨酸激酶受體（trk）以及閘門信號通路來促進神經(jīng)元干細胞的分化。因此，神經(jīng)因子被認

2、為是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）和周圍神經(jīng)系統(tǒng)（PNS）疾病可能的治療藥物。
　　腦源的神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）是1982年發(fā)現(xiàn)的直至1989年才確定其分子構(gòu)成從豬腦提取液中獲得的一種分子量為12．3KD的堿性蛋白。它的氨基酸序列與NT-3有55％的同源性，在程序性細胞死亡中可以挽救敏感神經(jīng)元的死亡。盡管骨骼肌表達BDNFmRNA，但是它最早被報道在離體培養(yǎng)的雞運動神經(jīng)元中報道BDNF不能支持運動神經(jīng)元的存活。從此，關(guān)于BDNF對于敏感

3、神經(jīng)元的作用開始得到越來越多的研究，并且人們開始研究BDNF對于交感神經(jīng)元和腦神經(jīng)元的作用。但是，最近大鼠中BDNF對于運動神經(jīng)元的作用已經(jīng)被研究所證實。BDNF的作用一般是通過其高親和力收提t(yī)rkB和trkC。BDNF和這些受體結(jié)合以后導致自身磷酸化使得它們能夠與磷酸化的蛋白相結(jié)合，直接激活這些蛋白從而誘導細胞生長和分化。
　　神經(jīng)生長因子3（NT-3）是神經(jīng)因子家族第三個發(fā)現(xiàn)的成員，是有119個氨基酸單位合成的分子量為28kD

4、a的一種堿性蛋白，等電點pI=9.3，與NGF有55％的同源性，但是它與NGF以及BDNF的不同之處在于它在交感神經(jīng)元的弱活性，NT-3的受體是trkC，它廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)（包括腦嗅球、小腦、海馬、隔膜）以及周圍神經(jīng)系統(tǒng)（胸腺、肌肉、肝臟、橫膈膜）。NT-3功能上誘導敏感神經(jīng)元和副交感神經(jīng)元的存活和分化，同時在離體培養(yǎng)中能夠支持運動神經(jīng)元的存活。調(diào)節(jié)神經(jīng)肌肉突觸的功能，并且阻止細胞發(fā)生程序性凋亡。
　　米諾環(huán)素是第二代半合成

5、四環(huán)素類藥物，有高脂溶性并能穿透血腦屏障，具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)作用以及神經(jīng)保護活性，近年來，已經(jīng)證實在脊髓損傷大鼠體內(nèi)，米諾環(huán)素能夠通過抑制小膠質(zhì)細胞活化、減少細胞凋亡、抑制氧自由基產(chǎn)物以及金屬蛋白酶（MMPs）、影響白細胞活化而減少白介素1（IL-1）的釋放等途徑來緩解脊髓損傷的癥狀。盡管作為治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的潛在藥物，米諾環(huán)素的治療作用毋庸置疑是綜合性的，而且已經(jīng)有很多研究顯示神經(jīng)因子在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中是不可或缺的，然而，幾乎沒有研究評

6、估米諾環(huán)素在脊髓損傷中對BDNF以及NT-3表達的影響。
　　本實驗的目的是在制備不完全脊髓損傷（iSCI）大鼠模型的基礎(chǔ)上，觀察米諾環(huán)素對大鼠運動功能的恢復以及其對大鼠體內(nèi)BDNF和NT-3表達的影響，并通過所得的實驗結(jié)果推測米諾環(huán)素神經(jīng)保護作用的可能機制。
　　實驗大鼠被隨機分成三組：空白對照組（CG）、損傷+生理鹽水組（NS）、損傷+米諾環(huán)素組（TG），觀察并記錄大鼠的行為學改變，并采用RT-PCR以及免疫組織化學法（

7、SABC法），分別檢測了三組大鼠在不同時間點體內(nèi)BDNF和NT-3的mRNA以及蛋白的表達情況。RT-PCR結(jié)果顯示：與CG組相比較，NS以及TG組大鼠體內(nèi)BDNF和NT-3的mRNA相對含量均升高，但TG組升高較NS組多，差異具有顯著性意義（P<0.05）。免疫組化結(jié)果顯示：在各組大鼠脊髓前角區(qū)內(nèi)，均有BDNF和NT-3蛋白陽性表達，但TG組以及NS組陽性反應(yīng)增強，而TG組表達比NS組強，差異具有顯著意義（P<0.05）。RT-PCR