米諾環(huán)素對(duì)大鼠肢體缺血在灌注繼發(fā)肺損傷的影響.pdf

1、肢體缺血再灌注所繼發(fā)肺損傷的表現(xiàn)是急性肺損傷(Acute lung injury，ALI)和成人呼吸窘迫癥(Adult respiratory distress syndrome，ARDS)，在急救醫(yī)學(xué)中是發(fā)病率和死亡率都很高的一種并發(fā)癥。ALI是ARDS病程早期階段，指機(jī)體遭受嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、休克等打擊后，出現(xiàn)以彌漫性肺泡毛細(xì)血管膜損傷導(dǎo)致肺水腫和肺不張等病理特征，臨床上的表現(xiàn)是呼吸窘迫，伴有頑固性低氧血癥、肺順應(yīng)性下降和擴(kuò)散性炎癥浸

2、潤(rùn)，進(jìn)行性加重表現(xiàn)為ARDS，其病死率高達(dá)45％-50％。因此積極防治本類疾病在急危重領(lǐng)域具有非常重要的意義。
　　 目的
　　 本實(shí)驗(yàn)利用大鼠下肢缺血/再灌注產(chǎn)生大量炎性介質(zhì)導(dǎo)致遠(yuǎn)隔器官肺損傷模型，觀察治療劑量的鹽酸米諾環(huán)素，對(duì)缺血再灌注所引起的肺組織中自介素-6的變化，肺組織基質(zhì)金屬蛋白酶-2和基質(zhì)金屬蛋白酶-9，和肺的干濕比變化，結(jié)合組織病理改變，進(jìn)一步探討鹽酸米諾環(huán)素對(duì)肢體缺血/再灌注后遠(yuǎn)隔器官肺損傷的保護(hù)作用及

3、其機(jī)制，為鹽酸米諾環(huán)素在肺臟保護(hù)方面的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)支持。
　　 材料與方法
　　 30只SD成年雄性大鼠(鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重230g±30)隨機(jī)分為三組，模型組(M組，n=10)、生理鹽水組(NS組，n=10)和米諾環(huán)素干預(yù)組(C組，n=10)。實(shí)驗(yàn)大鼠不限制活動(dòng)，自由進(jìn)食，進(jìn)水。三組大鼠乙醚吸入麻醉后，生理鹽水組待自然清醒；大白鼠NS組，M組，經(jīng)大鼠尾靜脈注入生理鹽水1.0ml；C組，米諾環(huán)素按公斤體重

4、10mg，(約1.0ml)由大鼠尾靜脈注射入體內(nèi)；M組和C組分別結(jié)扎大鼠雙下肢，以結(jié)扎后雙下肢變白為缺血成功標(biāo)志；3h后M組C組大鼠雙下肢結(jié)扎線去除，按摩大鼠雙下肢以皮膚色澤轉(zhuǎn)為紅潤(rùn)為肢體再灌注成功標(biāo)志。再灌注成功4h后三組均使用5％水合氯醛腹腔注射麻醉后，依次剪開胸腔，胸骨，暴露肺臟，迅速結(jié)扎右肺門，切除右肺，取右肺上葉測(cè)量干濕比，中葉置于-80℃冰箱中待用，右肺下葉置電鏡保護(hù)液中行透射電鏡觀察。經(jīng)右心耳進(jìn)行生理鹽水灌洗，左肺經(jīng)生理鹽

5、水灌洗變白后用甲醛適量灌洗，切去左肺下葉置于甲醛中浸泡，制備蠟塊，切片，HE染色觀察，免疫組化觀察基質(zhì)金屬蛋白酶-2和基質(zhì)金屬蛋白酶-9的在肺組織的著色及灰度對(duì)比。
　　 結(jié)果：
　　 1.肺組織含水量的改變：M組肺組織含水率明顯高于NS組(P<0.01)，C組肺組織含水率高于NS組低于M組(P<0.01)。
　　 2.組織病理變化：肺組織光鏡觀察，NS組肺泡結(jié)構(gòu)正常；M組肺間隔增寬，間質(zhì)中有大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，

6、局部肺泡出現(xiàn)不張、水腫，肺泡腔內(nèi)有大量紅細(xì)胞；C組肺間隔僅輕度增寬，少量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)無肺不張或肺出血。電鏡觀察，NS組肺毛細(xì)血管基底膜較完整，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞呈橢圓型或圓形，游離面微絨毛及板層體較完整，胞漿豐富。M組見到肺毛細(xì)血管基底膜連續(xù)性中斷，內(nèi)皮細(xì)胞間隙增寬，毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞微絨毛破壞程度嚴(yán)重，微絨毛可見變短、減少甚至消失，Ⅱ型上皮細(xì)胞板層體排空。C組游離面微絨毛破壞輕，損傷程度介于NS組與M組。
　

7、　 3.免疫組化SP法，肺組織中MMP-2，MMP-9的表達(dá)：免疫組化切片以平均光度、平均灰度、陽性面積、陽性單位為指標(biāo)進(jìn)行半定量分析。NS組平均光密度值，與M組平均光密度值相比(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。M組平均光密度值>C組平均光密度值>NS組平均光密度值(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.IL-6：NS組肺組織勻漿中IL-6含量極少，M組含量最高，C組含量介于M組與NS組之間。M組與C組相比(P<0.