肢體早期-延遲相聯(lián)合缺血預(yù)處理對大鼠肝缺血-再灌注損傷的影響.pdf

1、目的：
　　研究早期－延遲相聯(lián)合肢體遠(yuǎn)隔缺血預(yù)處理對大鼠肝缺血/再灌注損傷的作用及對Bcl-2、Bax的影響。
　　方法：
　　將體重為230～250g的40只健康的雄性SD大鼠隨機(jī)地分為5組（n=8/組）：假手術(shù)組（S組）：在大鼠開腹前24h行第一次麻醉，且不進(jìn)行其他處理，在大鼠開腹前行第二次麻醉，分離肝蒂，不做其余處理；缺血/再灌注組（I/R組）：在開腹前對大鼠的處理與S組相同，在開腹后用無損微血管夾阻斷血流進(jìn)入肝

2、左中葉，30min后松開微血管夾再灌注3h；早期相肢體遠(yuǎn)隔缺血預(yù)處理組（ELRIPC組）：在大鼠第二次麻醉前對大鼠的處理與S組相同，在第二次麻醉后采用捆綁法行肢體缺血預(yù)處理隨后使用 I/R組的方法構(gòu)建肝臟 I/R的模型；延遲相肢體遠(yuǎn)隔缺血預(yù)處理組（DLRIPC組）：在第一次麻醉之后對大鼠進(jìn)行肢體遠(yuǎn)隔缺血預(yù)處理，第二次麻醉之后使用與I/R組一致的方法構(gòu)建肝臟 I/R的模型；早期－延遲相聯(lián)合肢體遠(yuǎn)隔缺血預(yù)處理組（EDLRIPC組）：第一次麻

3、醉后對大鼠進(jìn)行肢體遠(yuǎn)隔缺血預(yù)處理，第二次麻醉后的處理方法與 ELRIPC組第二次麻醉后處理方法相同。各處理組大鼠在肝臟缺血30min再灌注3h后、S組在相同的時(shí)間段，取下腔靜脈血2ml，肝左中葉的部分切除后作為指標(biāo)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)檢測：生化分析儀測定相關(guān)酶系的活性；對肝臟切片進(jìn)行HE染色，光鏡下對肝臟組織顯微結(jié)構(gòu)的變化進(jìn)行觀察；采用免疫組化法檢測肝臟組織 Bcl-2及Bax蛋白的表達(dá)的陽性率（BI）；TUNEL法檢測肝細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI）。

4、r>　　結(jié)果：
　　1、血清中ALT和AST的水平：與S組相比，I/R組、ELRIPC組、DLRIPC組、EDLRIPC組ALT和AST的活性水平均有所提升，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與I/R組相比，ELRIPC組、DLRIPC組、EDLRIPC組ALT和AST的活性水平均降低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；ELRIPC組、DLRIPC組、EDLRIPC組三組間ALT和AST的水平相似，尚不能認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

5、
　　2、光鏡下肝臟組織的顯微結(jié)構(gòu)：S組中肝索結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)大致處于正常范圍，個(gè)別的肝血竇存在輕微充血；I/R組中肝組織的結(jié)構(gòu)異常紊亂，一少部分的細(xì)胞水腫飽脹并且表現(xiàn)出空泡狀變性甚至出現(xiàn)氣球樣變，肝血竇受到明顯的擠壓且存在炎性細(xì)胞零星地分散；ELRIPC組、DLRIPC組、EDLRIPC組中肝臟組織受到的損傷與I/R組相比較有顯著的好轉(zhuǎn)，而三組間的受損情況相仿。
　　3、各組中Bcl-2及Bax蛋白的表達(dá)陽性率(

6、BI)：與I/R組相比，ELRIPC組、DLRIPC組、EDLRIPC組中Bcl-2的BI值增高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，三組之間任意二組進(jìn)行比較尚不能認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與I/R組相比，ELRIPC組、DLRIPC組、EDLRIPC組各組中Bax的BI值明顯降低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，三組之間任意二組進(jìn)行比較尚不能認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4、各組中肝細(xì)胞的凋亡指數(shù)(AI)：與 S組相比，I/R組、

7、ELRIPC組、DLRIPC組、EDLRIPC組的AI值均上升，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與 I/R組相比， ELRIPC組、DLRIPC組、EDLRIPC組的AI值均降低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），三組之間任意二組進(jìn)行比較尚不能認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　EDLRIPC、ELRIPC、DLRIPC作用于大鼠的I/RI肝后均產(chǎn)生明顯的保護(hù)效應(yīng)， ELRIPC與DLRIPC單獨(dú)應(yīng)用時(shí)所產(chǎn)生的保護(hù)