光學(xué)離焦和形覺剝奪致幼恒河猴實驗性近視的中樞機制研究.pdf

1、2001級博士學(xué)位論文光學(xué)離焦和形覺剝奪致幼恒河猴實驗性近視的中樞機制研究光學(xué)離焦和形覺剝奪致幼恒河猴實驗性近視的中樞機制研究中山大學(xué)中山眼科中心專業(yè):博士研究生:導(dǎo)師:眼科學(xué)吳君舒葛堅教授摘要近視是最常見的眼科疾病之一，它在人群中尤其是青少年中的發(fā)病率有逐漸增高的趨勢，在某些亞洲國家和地區(qū)如新加坡、香港和臺灣，學(xué)齡兒童近視的發(fā)病率可高達60%80%，在我國，青少年近視的患病率約為50%70%，因此，如何有效防治青少年近視己經(jīng)成為一個1

2、待解決的社會問題，這也使得對近視發(fā)生機理的研究成為全球關(guān)注的熱點。雖然對近視發(fā)生機理的探索己逾兩百年，人們對近視的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸也有了一定的了解，但尚存在一些局限性:(1)以往的研究多采用雞、貓、樹鼠等動物建立實驗性近視模型，但由于這些動物與人類親緣關(guān)系相對較遠，且其眼球與高級視中樞的結(jié)構(gòu)功能與人類差別較大，因此用這些動物建立近視模型并非最佳選擇(2)目前己有的對近視機制的研究絕大多數(shù)是對眼球本身—鞏膜、脈絡(luò)膜、視網(wǎng)膜進行的，而對于視

3、覺傳導(dǎo)通路的高級中樞—視皮層在近視發(fā)生發(fā)展中的作用的研究則少有涉足。本研究主要圍繞這兩個問題，選用與人類親緣關(guān)系較近的高級靈長類動物幼恒河猴為實驗對象，通過光學(xué)離焦及形覺剝奪兩種方法誘導(dǎo)實驗性近視，并進一步探討幼恒河猴實驗性近視的中樞調(diào)控機制，以期為研究人類近視的發(fā)生機制及臨床實際工作中防治近視提供一定的理論基礎(chǔ)。2001級博士學(xué)位論文光學(xué)離焦和形覺剝奪致幼恒河猴實驗性近視的中樞機制研究Slit2的表達特點。方法:對照組動物戴鏡滿12周

4、后，分別采用兩種不同的方法取材:(1)麻醉后由主動脈插管灌注冷生理鹽水500m14%多聚甲醛1000m1，開顱取枕葉視皮質(zhì)，再經(jīng)4%多聚甲醛后固定，5%15%30%蔗糖梯度脫水(2)麻醉后由主動脈插管灌注冷生理鹽水500m1后直接迅速處死，取新鮮視皮質(zhì)，置于液氮中保存。前者所取標本作連續(xù)冰凍冠狀切片，分別用DAB顯色的免疫酶細胞化學(xué)染色和免疫熒光細胞化學(xué)染色方法檢測該組動物初級視皮層(V1區(qū))中兩種即刻早基因Egrlcfos，蛋白激酶P

5、KCa，谷氨酸脫狡酶GAD“和一種神經(jīng)生長導(dǎo)向因子Slit2陽性標記細胞的分布與數(shù)量，后者所取標本提取蛋白質(zhì)，用Westernblot方法檢測該組動物視皮層中以上五種因子蛋白產(chǎn)物的表達含量。結(jié)果:免疫組化染色結(jié)果顯示Egr1在正常正視化猴初級視皮質(zhì)(V1區(qū))各層細胞中的表達存在差別，在第23層，4C層和第6層，Egr1染色陽性神經(jīng)元密度較大，第5層中密度較稀疏cfos陽性染色神經(jīng)元主要分布于V1區(qū)的第4C層和第6層，其次分布于第23層，

6、第5層分布較少PKCa陽性染色神經(jīng)元主要分布于V1區(qū)的第2層，第4C層和第6層，其次分布于第3層，第5層分布較少GAD6，陽性染色神經(jīng)元主要分布于V1區(qū)的第3層下部，第4B4C層和第6層:Siit2陽性染色神經(jīng)元主要分布于V1區(qū)的第4C層和第6層，其次為第23層，第5層中陽性染色細胞較少。Westernblot檢測結(jié)果顯示Egr1cfosPKCaGAD65Slit2在正常正視化幼恒河猴視皮質(zhì)中均有特異性表達。結(jié)論:Egr1cfosPKC

7、aGAD65Slit2在正常正視化幼恒河猴的視皮質(zhì)中有特異表達，提示這幾種因子可能參與了幼恒河猴的正視化過程。第三部分視皮質(zhì)對幼恒河猴實驗性近視的可能調(diào)控機制目的:觀察視皮質(zhì)是否參與光學(xué)離焦和形覺剝奪所致幼恒河猴實驗性近視的發(fā)生和發(fā)展，初步探討幼恒河猴實驗性近視的可能中樞機制。方法:AB兩組動物戴鏡滿12周后，每組均分別采用兩種不同的方法取材，具體方法見第二部分。前者所取標本作連續(xù)冰凍冠狀切片，分別用DAB顯色的免疫酶細胞化學(xué)染色和免疫