幼恒河猴近視眼視網(wǎng)膜調控機制的蛋白質組學研究.pdf

1、近視眼是世界范圍內最常見的眼部異常之一，對其發(fā)病機制的研究一直是眼科研究的重要課題。研究者認為眼屈光系統(tǒng)發(fā)育受視網(wǎng)膜的初始調控，部分相關的視網(wǎng)膜轉錄因子已得到廣泛研究。本課題組發(fā)現(xiàn)早反應基因Egr-1在視網(wǎng)膜調控機制中充當著重要角色，但其上下游的具體信號傳導途徑尚未明確。 研究目的：本課題在以往研究的基礎上利用蛋白質組學技術研究幼恒河猴近視性離焦眼、鏡片矯正聚焦眼與形覺剝奪眼視網(wǎng)膜蛋白質的差異表達，以進一步揭示近視眼發(fā)生發(fā)展的視

2、網(wǎng)膜調控途徑。 研究方法：6只一月齡的恒河猴，隨機分為A、B兩組，均飼養(yǎng)于12h：12h的晝夜照明節(jié)律環(huán)境中。完成散瞳視網(wǎng)膜檢影、角膜地形圖檢查、A超測量玻璃體腔長度和眼軸長度后，兩組猴一眼佩戴散射鏡片(diffuser)，造成該眼的形覺剝奪，作為對照眼；另一眼根據(jù)散瞳視網(wǎng)膜檢影結果選取鏡片度數(shù)，設計戴鏡后A組達到完全矯正，B組造成視網(wǎng)膜+1.50D近視性離焦。處理2h隨機選取4只猴摘除眼球，分離視網(wǎng)膜、脈絡膜及鞏膜，保存于-8

3、0℃。其余2只猴繼續(xù)戴鏡至7天進行取材，并于取材前再次進行戴鏡視網(wǎng)膜檢影。提取視網(wǎng)膜蛋白質行雙向電泳，考馬斯亮藍染色。利用ImageMasterTM 2D Platinum凝膠圖像分析軟件分析凝膠。切取差異表達的蛋白點用胰酶消化并進行MALDI-TOF質譜分析和NCBI數(shù)據(jù)庫查詢。 結果：凝膠圖像分析軟件分析顯示形覺剝奪眼、鏡片矯正聚焦眼和近視性光學離焦眼這三組間存在視網(wǎng)膜蛋白表達差異，各處理組在兩個時間點(2h和7d)也存在視

4、網(wǎng)膜蛋白表達差異。通過MALDI-TOF質譜分析鑒定出3個差異點，分別對應于3種不同蛋白質--NDRG-1、磷酸甘油酸變位酶1和短鏈烯酰輔酶A水解酶(SCEH)。軟件分析顯示，NDRG-1在視網(wǎng)膜上的表達為近視性離焦眼最多、鏡片矯正聚焦眼居中、形覺剝奪眼最少。 結論：NDRG-1在形覺剝奪眼中表達下調，表明NDRG-1可能受Egr-1正向調控而參與近視眼視網(wǎng)膜調控通路的信號傳導。對此蛋白深入了解將加深對近視眼發(fā)生發(fā)展機制的認識。