疼痛應激對雄性SD大鼠生精功能及睪丸內(nèi)annexin5表達的影響.pdf

1、應激(stress)是指機體受到體內(nèi)外各種環(huán)境因素刺激時所作出的特異性和(或)非特異性反應。作戰(zhàn)應激反應(combat stress reaction,CRS)是指遭受戰(zhàn)爭環(huán)境刺激的軍人常常喪失應付正常生活能力,并伴有精神障礙；作戰(zhàn)應激反應若得不到干預會導致創(chuàng)傷后應激性障礙(post-traumatic stress disorder,PTSD)。從美軍一戰(zhàn)、二戰(zhàn)、越戰(zhàn)到海灣戰(zhàn)爭看出,作戰(zhàn)應激可能導致許多的應激性疾病,包括泌尿生殖系統(tǒng)疾

2、病,是部隊非戰(zhàn)斗減員的主要因為之一。疼痛是由傷害性刺激引起的一種應激反應,也是戰(zhàn)爭創(chuàng)傷引起的常見癥狀.急慢性疼痛,特別是慢性疼痛不僅對士兵的身體,而且對他們的心理也產(chǎn)生很大的影響,嚴重影響軍隊的戰(zhàn)斗力。
　　 文獻報道,多種形式的應激均能導致血漿糖皮質(zhì)激素水平迅速增加,睪酮水平降低,抑制生殖功能,甚至導致不育。Annexin5是一種鈣離子依賴性磷脂酰絲氨酸結(jié)合蛋白,在組織中有廣泛的分布,包括睪丸間質(zhì)細胞和支持細胞。Annexin

3、5具有多種功能,如抗炎、抗凝血、蛋白激酶C(PKC)抑制劑等。Kwaminami et al發(fā)現(xiàn)GnRH能促進垂體促性腺細胞中annexin5的表達,調(diào)節(jié)FSH和LH的分泌,提示annexin5可能參與并調(diào)節(jié)精子發(fā)生的過程。因此,本研究通過建立急慢性兩種不同動物模型模擬戰(zhàn)爭創(chuàng)傷引起的疼痛,即:福爾馬林(formalin)致炎的急性疼痛模型和坐骨神經(jīng)選擇性損傷(spared nerve injury,SNI)引起的慢性疼痛模型,觀察應激對

4、雄性SD大鼠生精功能及睪丸內(nèi)annexin5定位及表達的變化,為進一步研究應激對生殖的干擾及制定對應激所致的生殖損害的保護策略提供實驗依據(jù)。
　　 本研究以福爾馬林注射后1h,6h,24h,72h作為福爾馬林致炎急性疼痛應激模型,發(fā)現(xiàn)不同時間段應激后,大鼠體重、睪丸重量、睪丸指數(shù)、附睪重量、精子計數(shù)和睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu)均無顯著變化(P>0.05)。但是,附睪指數(shù)在福爾馬林注射后1h,6h,24h顯著高于對照組(P<0.05)。免疫組化

5、染色顯示,在福爾馬林注射后1h,3β-HSD表達顯著低于對照組(P<0.05),6h,24h3β-HSD表達逐漸增加,到72h時恢復到對照水平。急性疼痛應激不同時間段,annexin5的定位沒有明顯變化。福爾馬林注射后1h annexin5蛋白和對照組相比顯著降低(P<0.05),6h、24h逐漸升高,72h顯著高于對照組(P<0.05)。Annexin5在mRNA水平變化和蛋白水平變化一致,但不同時間段與對照組相比均無顯著差異。

6、>　　 以坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷誘導疼痛14d,21d,28d作為慢性疼痛應激,結(jié)果發(fā)現(xiàn):14d和21d手術(shù)組大鼠體重均低于對照組,但和同期對照組相比無顯著差異(P>0.05)。不同時間段各組大鼠睪丸和附睪系數(shù)均無明顯變化。28d后手術(shù)組附睪尾精子相對計數(shù)顯著低于對照組(P<0.05)。HE染色顯示,坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷誘導疼痛應激28d后睪丸生精上皮中生精細胞減少,生精小管腔內(nèi)精子數(shù)量減少。Western blot結(jié)果顯示28d手

7、術(shù)組3β-HSD表達顯著低于對正常照組和假手術(shù)組(P<0.05)。慢性疼痛應激14d和21d后,手術(shù)組大鼠睪丸almexin5在支持細胞定位減少。在蛋白質(zhì)水平,Annexin5在應激后14d和21d表達顯著降低(P<0.05),到28d恢復到對照組水平。在mRNA水平,坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷后14 d armexin5 mRNA顯著低于同期對照組,隨后逐漸增加,到28 d恢復到正常生理水平。
　　 結(jié)論:(1)急慢性疼痛應激狀態(tài)

8、下,雄性SD大鼠睪丸的生精功能受到了不同程度的影響,表現(xiàn)為:急性疼痛應激狀態(tài)下,睪丸內(nèi)3β-HSD的表達減少,睪丸分泌功能降低；慢性疼痛應激狀態(tài)下,附睪尾精子相對計數(shù)減少,生精小管中生精細胞減少,睪丸內(nèi)3β-HSD表達減少。(2)疼痛應激能誘導睪丸內(nèi)annexin5在蛋白質(zhì)和mRNA水平在不同時間點可能發(fā)生量的變化。急性疼痛應激狀態(tài)下annexin5蛋白含量隨時間先顯著降低而后顯著增加。慢性疼痛應激狀態(tài)下annexin5蛋白質(zhì)含量和mR